Después de aislar los neutrófilos de la sangre periférica humana, vuelva a suspenderlos en el medio RPMI 1640 en un tubo de centrífuga de 1,5 mililitros. Agregue un microlitro de matriz de ADN rojo permeable a la membrana a 1,5 mililitros de suspensión de neutrófilos e incube en la oscuridad durante cinco minutos. Centrifugar la suspensión de neutrófilos a 2.500 g durante cinco minutos a temperatura ambiente.
Después de la centrifugación, retire el tubo que contiene los neutrófilos granulados y aspire el sobrenadante. Resuspender los neutrófilos en un mililitro de RPMI y centrifugarlo de nuevo. Después del último lavado, resuspender los neutrófilos en un mililitro de RPMI.
Agregue un pequeño volumen de suspensión de neutrófilos al hemocitómetro y cuéntelos bajo un microscopio. Diluir la suspensión de neutrófilos a 1,5 veces 10 a la quinta neutrófila por mililitro utilizando RPMI. Agregue cuatro microlitros de uno a 100 colorantes de ADN verde impermeables de membrana prediluidos al mililitro de suspensión de neutrófilos.
Dispensar 100 microlitros de suspensión de neutrófilos por pocillo en una placa de 96 pocillos tratada con cultivo de tejido transparente. Agregue 100 microlitros de RPMI que contengan reactivos de estímulo con o sin inhibidor en los pocillos respectivos. Coloque la placa en un sistema de análisis de células vivas alojado en una incubadora de dióxido de carbono al 5%.