Saatgutschnittprotokoll und Matrixabscheidungstechnik für die MALDI-IMS-Analyse von harten Palmsamen

Tauchen Sie zunächst drei Euterpe precatoria-Samen und drei Euterpe edulis-Samen 24 Stunden lang in deionisiertes Wasser. Schalten Sie den Kryostaten nach 24 Stunden ein und lassen Sie die Temperatur 20 Grad Celsius erreichen. Nehmen Sie die nassen Samen aus dem Wasser und schneiden Sie sie mit einer Mikrotomklinge in zwei Hälften.

Bereiten Sie eine frische, warme 10%ige Gelatinelösung vor. Legen Sie die Hälfte der Samen auf eine Form und füllen Sie sie mit der Gelatinelösung. Frieren Sie es zwei Stunden lang bei 20 Grad Celsius ein, bevor Sie es in den Kryostaten bringen.

Befestigen Sie das eingebettete Saatgut mit einer optimalen Schnitttemperaturmasse (OCT) auf dem Kryostatenträger und lassen Sie es 10 Minuten lang im Kryostaten zur OCT-Aushärtung. Fügen Sie als Nächstes doppelseitiges Kupferklebeband zu einem mit Indiumzinnoxid beschichteten Glasobjektträger oder ITO-Objektträger hinzu. Von jeder Art werden 20 Mikrometer dicke Schnitte hergestellt und auf das Klebeband gelegt, das auf dem ITO-Objektträger haftet.

Legen Sie für die Matrixabscheidung den Objektträger mit den Scheiben in einen Vakuum-Exsikkator, bis er Raumtemperatur erreicht. Machen Sie Lehrmarkierungen mit einem Korrekturstift in jeder Folienecke und scannen Sie die Folie mit einem Tischscanner. Verwenden Sie eine Analysenwaage, um 30 Milligramm DHB zu wiegen.

Bereiten Sie dann eine Ein-Milliliter-Lösung vor, die zu gleichen Teilen Methanol und 0,1% Trichloressigsäure enthält, und lösen Sie das gewogene DHB in der vorbereiteten Lösung auf. Füllen Sie eine Ein-Milliliter-Glasspritze mit der DHB-Lösung und legen Sie sie auf eine Spritzenpumpe mit einer Durchflussrate von 0,8 Millilitern pro Stunde. Schließen Sie die Spritze mit einem Pick-Schlauch an eine chemische Ionisations- oder APCI-Nadel unter Atmosphärendruck an und verbinden Sie dann Stickstoff mit der Nadel.

Stellen Sie die Durchflussmenge auf 12,5 PSI ein. Befestigen Sie die APCI-Nadel an der XY-Bewegungsplattform. Achten Sie darauf, dass sich die Spitze der APCI-Nadel vier Zentimeter über dem Schlitten befindet.

Stellen Sie mit der Zeichensoftware die XY-Bewegungsplattform so ein, dass sie der Schablone folgt, und warten Sie, bis die Plattform die Schablone 20 Mal wiederholt hat.