शुरू करने के लिए, सुनिश्चित करें कि माइक्रोस्कोप लेआउट ऑप्टिकल टेबल की सतह पर सभी दूरियों को सही ढंग से मापा जाता है। फिर टेबल पर उत्तेजना लेजर माउंट करें। लेजर की इच्छित ऊंचाई के लिए दो irises सेट करें, और इन irises का उपयोग सुनिश्चित करें कि बीम स्तर और केंद्रित है.
अनुवाद की स्थिति एसtagई, या TS1, दर्पण 1, या M1 के स्थान के तहत। वांछित निकास बीम पथ को परिभाषित करने और प्रत्येक चिंतनशील तत्व के प्लेसमेंट और संरेखण का मार्गदर्शन करने के लिए सटीक ऊंचाई पर सेट irises की जोड़ी का उपयोग करें। इसके बाद, M1 को TS1 के शीर्ष पर रखें। फिर माउंट करें और टेबल पर डाइक्रोइक को संरेखित करें।
इसी तरह, गैल्वो को माउंट करें और इसे आईरिस के साथ संरेखित करें। एकदा संरेखण केले जातानंतर, M2 स्थिती नंतर M3 टेबलवर जकड़वा. ऊंचाई और स्थिति को समायोजित करें जब तक कि बीम मोटे तौर पर दोनों पाले सेओढ़ लिया ग्लास संरेखण डिस्क पर केंद्रित न हो।
फिर M3 में समर्थन जोड़ें। इसके बाद, टेबल पर लेंस 1 माउंट करना शुरू करें। झुकाव और पार्श्व स्थिति को समायोजित करें जब तक कि बीम एम 3 के ऊपर पाले सेओढ़ लिया ग्लास प्लेटों पर केंद्रित न हो। लेंस 2 की स्थिति बनाएं और बीम को दूर की सतह पर उछालने के लिए दर्पण का उपयोग करके कोलिमेशन की जांच करें।
बीम का पता लगाने के लिए इंडेक्स कार्ड या लक्ष्य का उपयोग करें और सुनिश्चित करें कि बीम आकार में नहीं बदलता है। फिर XY माउंट के साथ पिनहोल की x, y स्थिति और ट्रांसमिशन को अधिकतम करने के लिए एक-आयामी चरण के साथ अक्षीय दूरी को समायोजित करें। गैल्वो की सतह पर उत्तेजना बीम पर ध्यान केंद्रित करने के लिए लेंस 4 अक्षीय रूप से समायोजित करें और लेंस 3 को टेबल पर व्यवस्थित करें, उसके बाद SL1।
लेंस 4 के साथ एक कोलमेटेड टेलीस्कोप बनाने के लिए SL1 की अक्षीय दूरी को समायोजित करें, फिर TL1 को SL1 के समानांतर रखें। पिंजरे प्रणाली पर उद्देश्य 1 की ऊंचाई को समायोजित करें जब तक कि बीम छत पर एक हवादार डिस्क न बना ले। और तब तक समायोजन जारी रखें जब तक कि डिस्क का आकार छोटा न हो जाए।
उद्देश्य 1 के नमूना चरण पर वर्ग दर्पण रखें और दर्पण अक्षीय समायोजित जब तक बीम प्रोफ़ाइल के आकार dichroic के बाद कम से कम है. दो पिंजरे प्लेटों के खाली छेद में पिंजरे की छड़ फिसलने से संरेखण लेजर माउंट. संरेखण और उत्तेजना बीम के पथ संरेखित करने के लिए एक कीनेमेटिक दर्पण माउंट और एक ड्रॉपडाउन दर्पण का उपयोग करें।
डाइक्रोइक के बाद बीम प्रोफाइल को कम करने के लिए उद्देश्य 1 के नमूना चरण पर वर्ग दर्पण अक्षीय रूप से रखें। SL2 और TL2 को संबंधित दूरी पर उत्सर्जन पथ में डालें। XY knobs और उद्देश्य 2 के झुकाव को समायोजित इतना है कि लाल संरेखण बीम परितारिका और पाले सेओढ़ लिया गिलास डिस्क के माध्यम से गुजरता है.
अनुवाद चरण 2 को तब तक समायोजित करें जब तक कि बीम सतह पर एक छोटी हवादार डिस्क न बना ले, और फिर हवादार डिस्क के आकार को कम करने के लिए अनुवाद चरण 2 को समायोजित करना जारी रखें। वैरिएंट स्कैनिंग में झुकाव के लिए गैल्वो को अनुकूलित करने के लिए, गैल्वो के लिए त्रिकोण तरंग संकेत का चयन करने के लिए तरंग जनरेटर पर एफएसके बटन दबाएं और इसे कम आवृत्ति, जैसे 1 हर्ट्ज पर सेट करें। उसी दूर की सतह या दीवार पर संरेखण बीम का निरीक्षण करें।
उद्देश्य 3 को उद्देश्य 2 के सामने लगभग 4-5 मिलीमीटर 0 डिग्री के कोण पर माउंट करें और मिलान करने के लिए ऊंचाई समायोजित करें। एक पाले सेओढ़ लिया गिलास संरेखण डिस्क SL2 और TL2 के बीच साझा फोकल विमान में एक शासक के साथ मापा के रूप में स्थिति. एक बार जब उत्सर्जन प्रकाश O3 के बैक एपर्चर को भर देता है, तो कैमरा सेंसर की खुरदरी स्थिति में एक पाले सेओढ़ लिया ग्लास डिस्क को माउंट करें और डिस्क के केंद्र को O3 से बाहर निकलने वाले उत्सर्जन प्रकाश में संरेखित करें। उद्देश्य 3 के पीछे TL3 की स्थिति बनाएं और पाले सेओढ़ लिया ग्लास डिस्क के साथ आउटगोइंग लाइट को संरेखित करने के लिए झुकाव को समायोजित करें।
कैमरे को ट्यूब लेंस से मापी गई दूरी पर रखें और उद्देश्य 3 अक्षीय रूप से पिंजरे अनुवाद चरण से तब तक समायोजित करें जब तक कि छेद कैमरे पर फ़ोकस में न हो। एक गाइड के रूप में तालिका पर लाइनों का उपयोग करके उद्देश्य 2 के ऑप्टिकल अक्ष से 30 डिग्री के कोण पर उद्देश्य 3 को समायोजित करें। एक ही अक्षीय ऊंचाई पर सकारात्मक ग्रिड परीक्षण लक्ष्य को रिमाउंट करें और उज्ज्वल क्षेत्र प्रकाश के साथ ग्रिड को रोशन करें।
स्क्रीन भर में देखने के क्षेत्र के इन-फ़ोकस भाग को क्षैतिज रूप से स्वीप करें जबकि ग्रिड वर्ग एक समान आकार बनाए रखते हैं। तिरछी प्रकाश शीट को संरेखित करने के लिए, बेलनाकार लेंस, या सीएल की स्थिति बनाएं, ताकि बीम सीएल 3 के फोकल प्लेन पर एक क्षैतिज शीट प्रोफाइल में केंद्रित हो। सीएल 3 और लेंस 3 के बीच फोकल विमान पर ऊर्ध्वाधर अभिविन्यास में एक भट्ठा डालें और स्थिति दें।
कैमरा सेंसर पर, पुष्टि करें कि 0 डिग्री लाइट शीट पतली और लंबवत दिखाई देती है। मोटर चालित अनुवाद चरण नियंत्रण का उपयोग करके, प्रकाश शीट को कोण करने के लिए बेलनाकार लेंस की ओर M1 का अनुवाद करें। नमूना चरण पर पहले से तैयार रोडामाइन लेबल सूक्ष्मनलिका परीक्षण नमूना डालें और इसे अक्षीय रूप से समायोजित करें ताकि डाई देखने के क्षेत्र के केंद्र और स्क्रीन के दाईं ओर के बीच पांच अलग-अलग गहराई पर प्रकाश शीट द्वारा प्रकाशित हो।
फिर प्रत्येक छवि को सहेजें। फिजी में छवियों को खोलें। प्रत्येक छवि के लिए, लाइन टूल का उपयोग करके देखने के क्षेत्र के केंद्र से प्रकाश शीट के केंद्र तक एक क्षैतिज रेखा खींचें।
फिर एनालिसिस पर जाएं, उसके बाद प्लॉट प्रोफाइल 01 से ऊपर लाइट शीट के कोण की गणना करने के लिए। साधन अंशांकन के बाद, पूर्व तैयार तीन आयामी मनका नमूना माउंट और समारोह जनरेटर पर FSK बटन क्लिक करें एक त्रिकोण लहर सेट. नमूना खोजने के लिए, 20 मेगाहर्ट्ज़ आवृत्ति, 400 मिलीवोल्ट पीक से पीक आयाम और 0.4 ऑफसेट से शुरू होने वाले मापदंडों को सेट करने के लिए फ़ंक्शन जनरेटर का उपयोग करें।
नमूना विमान तक पहुंचने तक मैन्युअल रूप से Z में स्क्रॉल करें और Z सेटिंग को अनुकूलित करें। माइक्रोमैनेजर प्रोग्राम में, एक एक्सपोज़र समय चुनें और बहुआयामी अधिग्रहण विंडो खोलें। अंतराल को 30 पर सेट करें और फ़्रेम की संख्या चुनने के लिए गणना बॉक्स का उपयोग करें।
एक बार पैरामीटर सेट हो जाने के बाद, वॉल्यूम के एक पूर्ण स्कैन के लिए समय चूक रिकॉर्ड करें। पुनर्गठित सूक्ष्मनलिका नेटवर्क के वॉल्यूमेट्रिक स्कैन से पता चला है कि त्रि-आयामी संरचनाएं केंद्र की ओर घनी हो गईं, जिसके परिणामस्वरूप प्रतिदीप्ति के उज्ज्वल क्षेत्र हुए। कवर पर्ची के पास इमेजिंग विमानों में, कॉन्फोकल माइक्रोस्कोपी ने ऊपर से आउट-ऑफ-फोकस फ्लोरोसेंट संकेतों के कारण केंद्र की ओर अतिरिक्त पृष्ठभूमि के साथ एस्टार की परिधि के चारों ओर एकल फिलामेंट्स को हल किया।
हालांकि, Z में कुछ माइक्रोन को स्थानांतरित करने से Astar के आउट-ऑफ-फोकस घने वर्गों के कारण छवियों की गुणवत्ता कम हो गई। प्रकाश शीट की एकल विमान रोशनी ने आउट-ऑफ-फोकस संकेतों को समाप्त कर दिया, जिससे विमानों के बीच तुलनीय छवि गुणवत्ता की अनुमति मिली।
