转染 mPSC 后,从六孔板中抽吸培养基。然后在每个孔中加入 200 微升胰蛋白酶。在 37 摄氏度下旋转并孵育 30 秒。
轻拍板的侧面,加入 200 微升冰冷的 FACS 缓冲液。使用 P200 移液管,混合每个孔的内容物以去除细胞并制备单细胞溶液。将 200 μL 从每个孔转移到 96 孔板上的相应孔中,以 300 G 离心板 5 分钟。
离心后,将沉淀重悬于150μL FACS缓冲液中,然后再在流式细胞仪上运行样品。与反向转染相比,正向横断显示标记物阳性的细胞比例显著降低。有趣的是,正向转染向细胞群平均输送的 DNA 量并没有显著降低。
在反向横断面中,孵育时间显著影响了报告阳性细胞的百分比。然而,阳性细胞中报告基因的平均表达不受孵育时间的影响。对于多转染和共转染,与反向转染相比,正向转染显著减少了所选终点处的细胞数量。
在反向多样断面的情况下,观察到更高的转染效率和更宽的动态范围,即代表性良好的DNA比率。