Per iniziare, prendi la rana che è stata immersa nella soluzione per l'eutanasia per un'ora e pizzicale il piede per verificare l'assenza di una risposta al dolore. Pesa lo Xenopus e prendi ulteriori misure come la lunghezza dal muso allo sfiato. Posiziona la rana sulla schiena e fissa i suoi arti vicino al corpo.
Usando le forbici da dissezione, praticare un'incisione attraverso la pelle lungo la linea mediana, quindi estenderla lateralmente per creare due lembi di pelle. Quindi individua la linea alba e afferrala con una pinza. Estrarlo delicatamente dalla cavità celomica e, con le forbici, tagliare la muscolatura sottostante.
Create due lembi dalla parete della cavità. Identifica il cuore che batte ancora e usa le forbici da dissezione per tagliare le ossa coracoidee per un migliore accesso. Ora utilizza una pinza per tessuti per identificare il pericardio sottile e allungarlo.
Usando la punta delle forbici per iridectomia, perforare con cura il pericardio. Quindi rimuovere il pericardio dalle tre camere del cuore. In questo protocollo, viene mostrato il campionamento del ventricolo cardiaco, del lobo sinistro del fegato, del pancreas, del corpo grasso, dei reni appaiati.
Per campionare il ventricolo cardiaco, afferrare il ventricolo all'apice con una pinza, individuare la sua connessione con i padiglioni auricolari e il tronco arterioso e recidirlo al di sotto di questi punti. Successivamente, osserva i tre lobi del fegato. Sollevare delicatamente il lobo sinistro per esporre i dotti epatici e cistici e prelevare un terzo di questo lobo sotto i dotti.
Se la rana è femmina, individuare l'ovaio coperto dall'epitelio germinale. Riposizionare delicatamente i lobi su ciascun lato per rivelare l'area di attacco. Usa le forbici per asportare le ovaie il più vicino possibile ai reni senza danneggiarli.
Quindi esaminare il lobo mediale del fegato e le sue connessioni con lo stomaco e il duodeno attraverso il mesentere e il dotto epatopancreatico. Usando le forbici per iridectomia, taglia il mesentere, il legamento epatoduodenale e il dotto epatopancreatico vicino al duodeno. Staccare il pancreas e il dotto dal lobo mediale del fegato senza lasciare attaccato il tessuto epatico scuro.
Quindi, tieni lo stomaco con l'aiuto di una pinza dentata, quindi usa una pinza per tessuti per tenere l'estremità superiore del pancreas. Con un ingrandimento 5X, separare accuratamente il pancreas dallo stomaco. Ora individua e asporta la vescica urinaria, tagliando il più vicino possibile alla cloaca, quindi scarta il tessuto.
Dopodiché, identifica l'intestino crasso e allungalo, recidendolo vicino alla cloaca. Quindi, separa i corpi adiposi su ciascun lato, afferra la base del corpo adiposo sinistro e taglialo dal peritoneo. Nel caso di rane femmine o maschi con ovidotti vestigiali visibili, tenere un ovidotto e separarlo dal rene e dalla cloaca.
Tagliare la giunzione della cloaca e continuare a staccarla dal rene, rimuovendo eventuali attacchi peritoneali chiari. Ora usa il forcipe per trattenere i reni e taglia il peritoneo alla loro estremità inferiore. Sollevare i reni dalla cavità celomica usando le forbici.
Staccare il peritoneo il più vicino possibile ai reni senza causare danni. Con un ingrandimento 5X, rimuovere il peritoneo in eccesso e i tessuti residui come testicoli, corpi adiposi o milza. Dopo aver rilasciato l'animale, mettilo a pancia in giù e fissa i suoi arti.
Scegli un arto posteriore per il campionamento e fissa il suo piede. Asportare un lembo di pelle a forma di mandorla dall'area del gastrocnemio o della tibiofibula. Successivamente, sciacquare tutti i campioni in PBS, verificare la presenza di tessuti in eccesso e tagliare prima dell'uso, se necessario.
Il ventricolo cardiaco, il lobo sinistro del fegato, il pancreas, i corpi adiposi sinistri, i reni accoppiati e un lembo di pelle sono stati asportati in modo pulito entro un'ora dall'eutanasia.
