Para empezar, toma la rana que ha estado sumergida en la solución de eutanasia durante una hora y pellizca su pata para comprobar si no hay una respuesta al dolor. Pesa el Xenopus y toma medidas adicionales, como la longitud desde el hocico hasta la cloaca. Coloca a la rana boca arriba y asegura sus extremidades cerca del cuerpo.
Con unas tijeras de disección, haz una incisión a través de la piel a lo largo de la línea media y luego extiéndela lateralmente para crear dos colgajos de piel. A continuación, localiza la línea alba y sujétala con pinzas. Sácalo suavemente de la cavidad celómica y, con unas tijeras, corta la musculatura subyacente.
Crea dos solapas desde la pared de la cavidad. Identifique el corazón que aún late y use tijeras de disección para recortar los huesos coracoideos para un mejor acceso. Ahora emplee pinzas de tejido para identificar el pericardio delgado y estirarlo.
Con la punta de las tijeras de iridectomía, perfore cuidadosamente el pericardio. A continuación, retire el pericardio de las tres cavidades del corazón. En este protocolo, se muestra la muestra del ventrículo cardíaco, lóbulo izquierdo del hígado, páncreas, cuerpo graso, riñones pareados.
Para tomar muestras del ventrículo cardíaco, agarre el ventrículo por el ápice con fórceps, localice su conexión con las aurículas y el tronco arterial, y córtelo por debajo de estos puntos. A continuación, observa los tres lóbulos del hígado. Levante suavemente el lóbulo izquierdo para exponer los conductos hepáticos y quísticos, y tome muestras de un tercio de este lóbulo por debajo de los conductos.
Si la rana es hembra, ubica el ovario cubierto por el epitelio germinal. Vuelva a colocar suavemente los lóbulos a cada lado para revelar el área de fijación. Use tijeras para extirpar los ovarios lo más cerca posible de los riñones sin dañarlos.
A continuación, examine el lóbulo medial del hígado y sus conexiones con el estómago y el duodeno a través del mesenterio y el conducto hepatopancreático. Con unas tijeras de iridectomía, corte el mesenterio, el ligamento hepatoduodenal y el conducto hepatopancreático cerca del duodeno. Separe el páncreas y el conducto del lóbulo medial del hígado sin dejar tejido hepático oscuro adherido.
A continuación, sostenga el estómago con la ayuda de pinzas dentadas, luego use pinzas de tejido para sujetar el extremo superior del páncreas. Con un aumento de 5X, separe cuidadosamente el páncreas del estómago. Ahora localice y extirpe la vejiga urinaria, cortando lo más cerca posible de la cloaca, y luego deseche el pañuelo.
Después de eso, identifique el intestino grueso y estírelo, cortándolo cerca de la cloaca. A continuación, separe los cuerpos grasos a cada lado, agarre la base del cuerpo graso izquierdo y córtelo del peritoneo. En casos de ranas hembras o machos con oviductos vestigiales visibles, sostenga un oviducto y sepárelo del riñón y la cloaca.
Haga un corte en la unión de la cloaca y continúe separándola del riñón, eliminando cualquier inserción peritoneal clara. Ahora use fórceps para sostener los riñones y corte el peritoneo en su extremo inferior. Levanta los riñones de la cavidad celómica con unas tijeras.
Separe el peritoneo lo más cerca posible de los riñones sin causar daño. Con un aumento de 5X, elimine el exceso de peritoneo y los tejidos residuales, como los testículos, los cuerpos grasos o el bazo. Después de liberar al animal, colóquelo boca abajo y asegure sus extremidades.
Elija una extremidad trasera para tomar muestras y asegure su pata. Extraiga un colgajo de piel en forma de almendra sobre el área de gastrocnemio o tibiopero. Después, enjuague todas las muestras en PBS, compruebe si hay exceso de pañuelos y recorte antes de usar si es necesario.
El ventrículo cardíaco, el lóbulo izquierdo del hígado, el páncreas, los cuerpos grasos izquierdos, los riñones emparejados y un colgajo de piel fueron extirpados limpiamente una hora después de la eutanasia.
