항진균 광역학 치료에서 미토콘드리아 기능 분석은 칸디다 글라브라타의 몸집이 작은 식민지를 유도합니다.

먼저 Candida Glabrata 배양 및 YPD 배지를 작업 플랫폼에 놓습니다. 600 나노미터에서 Yeast Cell Suspension의 광학 밀도를 YPD 배지를 사용하여 0.65로 조정합니다. 이스트 현탁액 1ml와 111 마이크로리터의 2% 로즈 벵골을 둥근 뚜껑이 있는 튜브에 섞습니다.

혼합물을 섭씨 25도에서 15분 동안 배양하고 155RPM에서 45도 각도로 회전합니다. 배양 후에, 혼합물을 1.5 밀리리터 관에 옮기고, 16, 2.5 분 동안 100 G에 분리한다. 상층액을 버리고 튜브를 부드럽게 다섯 번 긁어 펠릿을 부유시킵니다.

PBS로 현탁액을 네 번 세척하여 로즈 벵골을 모두 제거합니다. 최종 세척 후, 200 마이크로 리터의 Rose Bengal loaded Yeast Suspension을 96 웰 플레이트의 3 웰 각각에 옮깁니다. 아래에서 녹색 빛을 비추는 LED 전구가 있는 Photodynamic Light System에 플레이트를 놓습니다.

LED 조명 시스템을 활성화하여 2분 동안 제곱센티미터당 4.38줄의 광역학 요법 투여량을 제공합니다. 방사선 조사 후 180 마이크로리터의 PBS가 들어있는 웰에 20 마이크로리터의 효모 현탁액을 추가하여 10배 희석을 생성합니다. 각 희석 계수에 대해 YPD 오거 플레이트의 사분면당 20마이크로리터를 플레이트합니다.

플레이트를 뒤집어 섭씨 37도에서 밤새 배양합니다. 다음 날, 각 사분면에 있는 콜로니의 수를 세십시오. 주어진 공식을 사용하여 밀리리터당 콜로니 형성 단위를 계산합니다.

20 마이크로 리터의 20 % 트리 페닐 테트라 졸륨 클로라이드를 각 콜로니의 중앙에 직접 넣고 섭씨 37도에서 30-40 분 동안 배양합니다. 48비트 풀 컬러 광학 스캐너를 사용하여 1, 200DPI로 플레이트를 스캔합니다. Lag Growth Phase에서 TZero Yeast Suspension을 준비한 후 4.38% Rose Bengal이 있는 상태에서 녹색 빛 제곱센티미터당 0.2줄에 노출시킵니다.

살아남은 곰팡이를 T-1로 표시하십시오. 살아남은 곰팡이를 동일한 PDT 용량에 노출시킵니다. C-Glabrata의 몸집이 작은 돌연변이는 일반 크기의 처리되지 않은 부모 곰팡이에 비해 느린 성장을 보였습니다.

단일 항균 광역학 요법 치료는 대조군에 비해 C-Glabrata의 성장을 3배 지연시켜 유의하게 억제했습니다. C-Glabrata, 항균 광역학 요법 치료 후 24시간 후 크고 작은 몸집이 작은 콜로니가 있는 바이모달 콜로니 크기 분포를 보였습니다. 흰색을 유지한 몸집이 작은 콜로니는 미토콘드리아 기능 장애를 보인 반면, 일부 작은 붉은 색 콜로니와 정상 크기의 콜로니는 정상적인 미토콘드리아 기능을 유지했습니다.