Trapianto di sferoidi epatici nella camera anteriore dell'occhio di topo per studi di imaging

Per iniziare, raccogli tutte le risorse necessarie e pulisci la siringa, il tubo e la cannula di Hamilton con etanolo al 70%, seguito da soluzione fisiologica. Dopo averli riempiti di soluzione fisiologica, fissare la siringa di Hamilton al banco orizzontalmente. Quindi, preparare l'unità di isoflurano per anestesia e riscaldare il termoforo a 37 gradi Celsius.

Coprire le punte delle pinze attaccate al giunto cardanico solido con un pezzo di tubo di polietilene per formare un anello. Utilizzando una pipetta da 200 microlitri e un puntale, trasferire gli sferoidi epatici dalla piastra a 96 pozzetti in una piastra di sospensione cellulare da 35 millimetri contenente terreni di manutenzione. Dopo aver anestetizzato il mouse, trasferirlo sul termoforo e immobilizzare la testa con le viti.

Quindi, estrai delicatamente l'occhiello dall'orbita e fissalo con la pinza. Per evitare che si secchi, mettere una goccia di soluzione fisiologica su entrambi gli occhi. Con la siringa di Hamilton, aspirare gli sferoidi epatici sotto lo stereoscopio.

Posizionare la cannula orizzontalmente su una superficie pulita. Usando un ago calibro 23, perforare con cura la cornea e far scorrere l'ago lateralmente per allargare l'incisione. Asciugare l'umore acqueo che filtra con un fazzoletto e aggiungere gocce saline all'occhio per mantenerlo umido.

Posizionare la cannula verticalmente per far gravitare gli sferoidi epatici verso la punta, quindi inserirla delicatamente nel foro. Usando la siringa di Hamilton, espellere lentamente gli steroidi epatici nell'ACE. Usando la punta della cannula, pungolare delicatamente la cornea dall'esterno per posizionare gli sferoidi epatici attorno alla pupilla.

Dopo 5-10 minuti, rilasciare l'occhio dal forcipe. Per lubrificare e guarire la cornea, applicare l'unguento oculare alla vaselina sull'occhio operato. Prima di risvegliare il topo, somministrare l'analgesico per via sottocutanea per evitare fastidi postoperatori.