Para começar, reúna todos os recursos necessários e limpe a seringa, o tubo e a cânula de Hamilton com etanol a 70%, seguido de solução salina. Depois de enchê-los com solução salina, prenda a seringa Hamilton na bancada horizontalmente. Em seguida, prepare a unidade de anestesia Isoflurano e aqueça a almofada de aquecimento a 37 graus Celsius.
Cubra as pontas da pinça presa à junta universal sólida com um pedaço de tubo de polietileno para formar um laço. Usando uma pipeta e ponta de 200 microlitros, transfira os esferóides hepáticos da placa de 96 poços para uma placa de suspensão de células de 35 milímetros contendo meios de manutenção. Depois de anestesiar o mouse, transfira-o para a almofada de aquecimento e imobilize a cabeça com os parafusos.
Em seguida, retire suavemente o olho da cavidade e prenda-o com a pinça. Para evitar o ressecamento, coloque uma gota de solução salina em ambos os olhos. Com a seringa de Hamilton, aspire os esferóides hepáticos sob o estereoscópio.
Coloque a cânula horizontalmente em uma superfície limpa. Usando uma agulha de calibre 23, perfure cuidadosamente a córnea e deslize a agulha para o lado para alargar a incisão. Seque o humor aquoso com um lenço de papel e adicione gotas salinas ao olho para mantê-lo úmido.
Posicione a cânula verticalmente para permitir que os esferóides do fígado gravitem em direção à ponta e, em seguida, insira-a suavemente no orifício. Usando a seringa Hamilton, expulse lentamente os esteróides hepáticos para a ECA. Usando a ponta da cânula, cutuque suavemente a córnea do lado de fora para posicionar os esferoides hepáticos ao redor da pupila.
Após 5 a 10 minutos, solte o olho da pinça. Para lubrificar e curar a córnea, aplique pomada ocular de vaselina no olho operado. Antes de acordar o camundongo, administre o analgésico por via subcutânea para evitar desconforto pós-operatório.
