शुरू करने के लिए, तैयार नमूने के कण आकार और कण आकार वितरण का आकलन करने के लिए एक स्वचालित सेल काउंटर शुरू करें। गिनती स्लाइड के कुएं में अल्ट्रा-शुद्ध पानी में कण निलंबन का एक माइक्रोलीटर जोड़ें। निलंबन के एक मिलीलीटर में कणों की संख्या की जांच करें, साथ ही उनकी संख्या और आकार वितरण के साथ।
0.04 ग्राम अनलोडेड या फ्लेवोनोइड-एनकैप्सुलेटेड लिग्निन कणों का वजन करें। तौला कणों को एक Erlenmeyer फ्लास्क में स्थानांतरित करें। फिर 0.1 मोलर हाइड्रोक्लोरिक एसिड के 10 मिलीलीटर जोड़ें, और फ्लास्क को 250 आरपीएम पर सेट चुंबकीय उत्तेजक पर रखें।
इसके बाद, सोडियम हाइड्रॉक्साइड के 0.1 दाढ़ मानक समाधान के साथ 50-मिलीलीटर ब्यूरेट भरें। एक बेंच पीएच मीटर का उपयोग करके, अनुमापन शुरू करने से पहले एर्लेनमेयर फ्लास्क में समाधान के प्रारंभिक पीएच को मापें। अब अनुमापन प्रक्रिया शुरू करें और अनुमापक के प्रत्येक 0.5 मिलीलीटर जोड़ के बाद विश्लेषण किए गए समाधान के पीएच को मापें।
तालिका में प्रयोगात्मक डेटा रिकॉर्ड करें, लागू अनुमापांक की मात्रा और इसी पीएच मान को ध्यान में रखते हुए। एक बार जब अनुमापन समाधान की बढ़ती मात्रा के साथ लगभग निरंतर पीएच मान मनाया जाता है, तो अनुमापन को रोकें। प्रयोगात्मक डेटा को शून्य, प्रथम और द्वितीय व्युत्पन्न विभेदक अनुमापन वक्रों के रूप में चित्रित कीजिए।
0.1 मोलर जलीय सोडियम क्लोराइड समाधान के 60 मिलीलीटर तैयार करें। पांच स्टॉपर शंक्वाकार फ्लास्क लें और प्रत्येक फ्लास्क में 0.1 मोलर सोडियम क्लोराइड समाधान के नौ मिलीलीटर जोड़ें। पीएच को क्रमशः 2, 4, 7, 10 और 12 के प्रारंभिक मूल्यों में समायोजित करें।
फिर कुल समाधान मात्रा को ठीक 10 मिलीलीटर तक समायोजित करने के लिए अतिरिक्त सोडियम क्लोराइड समाधान जोड़ें। अब प्रत्येक फ्लास्क में 40 मिलीग्राम सूखे लिग्निन कण जोड़ें और उन्हें सुरक्षित रूप से कैप करें। फ्लास्क को एक कक्षीय प्रकार के बरतन पर सीधा संलग्न करें और उन्हें 24 घंटे के लिए हिलाएं।
फ्लास्क को 30 मिनट के लिए संतुलित होने दें। फिर प्रत्येक फ्लास्क में सतह पर तैरनेवाला के अंतिम पीएच को मापें। अंतिम पीएच मानों को संबंधित प्रारंभिक पीएच मानों के खिलाफ प्लॉट करें।