כדי להתחיל, להכין את מחזיקי מהדק מלחציים מתכת. הכניסו מחזיקי מהדק תואמים עם מהדק מתכת אחד כל אחד לתחנת ההרכבה. הניחו חתיכות נייר רטובות על גבי מהדקי המתכת.
חותכים את הנייר לאורך הגבולות הפנימיים של מלחציים עם אזמל. חותכים עוד שתי פיסות נייר קטנות יותר ושומרים אותן רטובות. בעזרת פינצטה מחודדת, הניחו שמונה עציצי ליבה על הנייר בין מהדקי המתכת עם נקודות הקצה שלהם על המלחציים.
כסו את נקודות הקצה של עציצי הליבה בחתיכות נייר קטנות יותר והניחו מהדקי מתכת מלמעלה. השתמש במברג ובברגים קטנים כדי לקבע את עציצי הליבה בין מהדקי המתכת למחזיק המהדק. העבירו בזהירות את צמחי הליבה המהודקים לתאי תרבית סיליקון ומלאו תאים אלה בשני מיליליטר של מדיום תרבית תאים סטנדרטי.
לאחר מכן לקבע את assembloid עם ברגים נוספים. כדי להכין את הקולגן הידרוג'ל, יש להסיר תחילה תאי מטרה מכלי תרבית רקמה באמצעות תמיסת ניתוק תאים. לאחר מכן צנטריפוגה ב-400 גרם למשך חמש דקות בטמפרטורת החדר ואז תלויה מחדש במיליליטר אחד של מדיום תרבית סטנדרטי.
לאחר מכן, הכינו תמיסת קישור צולבת על ידי ערבוב 10 מיקרוליטר PBS, 1.28 מיקרוליטר של NaOH טוחנת אחת, ו-8.72 מיקרוליטר מים מזוקקים כפול לכל מכלול. מוסיפים את תרחיף התא של עד 12 מכלולים ומניחים את הצינור על קרח. התאם את תרחיף התא כך שיושגו הריכוזים הסופיים הבאים.
בנפרד, הכינו תמיסה אחת של קולגן על ידי הוספת 80 מיקרוליטר קולגן, אחד לכל אסמבלואיד, והניחו את הצינור על קרח. ברגע שהתמיסות מוכנות על קרח, שאפו את מדיום תרבית התאים מהתאים המכילים את צמחי הליבה המהודקים. הוסיפו קולגן בתמיסה אחת לתמיסת הקישור הצולב, וערבבו על ידי פיפטינג מהיר מבלי ליצור בועות.
הוסיפו 200 מיקרוליטר של התמיסה המעורבת לחריצים בתאי הסיליקון כדי לכסות את צמחי הליבה של הגידים הבודדים. תן הידרוג'לים פילמור במשך 50 דקות ב 37 מעלות צלזיוס. לאחר מכן מלאו בזהירות את תאי תרבית הסיליקון ב -1.5 מיליליטר של מדיום התרבות המשותפת בהתאמה על ידי פיפטתו לפינות החדרים.
מניחים את התאים בצלחת פטרי גדולה או בקופסה סטרילית לפני שמכניסים אותם לאינקובטור. תרבות המכלולים בתנאים מתאימים, החלפת מדיום התרבות פעמיים בשבוע. הסר את המכלולים מן מלחציים עם מספריים.
במידת הצורך, השתמשו בפינצטה כדי להפריד את צמחי הליבה מתא ההידרוג'ל החיצוני. לאחר גידול האסמבלואיד בתנאי תרבית דמויי נגע במשך למעלה מ-21 יום, נצפה כי צמח הליבה נותר נמתח מכנית, ללא שינוי במראהו, ניתן להבחנה חזותית וניתן להפרדה פיזית מההידרוג'ל שמסביב. יתר על כן, ההידרוג'ל שמסביב נדחס עם הזמן, בהתאם לאוכלוסיית תאי הזרעים עם פיברובלסטים שמקורם בגיד אכילס המתכווצים בהידרוג'ל הסובב אותם הכי מהר.
הערכת מיקרוסקופ קונפוקלי לכדאיות, מורפולוגיה והתפשטות תאים בהידרוג'ל קולגן תלת-ממדי גילתה כי הכדאיות נשמרה במהלך תרבית אסמבלואיד לפחות עד היום השביעי. יתר על כן, ביטוי הגנים של Vegfa ו- Mmps גדל מאוד בצמחי ליבה כפי שניתן לראות על ידי ניתוח שעתוק. באופן דומה, ניתוח הפרשה זיהה נוכחות של ציטוקינים כגון גורם גדילה אנדותל כלי דם בצמחי הליבה.
