首先,从立体定位框架中释放溴酚蓝染料注射的小鼠。麻醉后,用胶带将鼠标固定在泡沫板上。在右心耳做一个 1 到 2 毫米的切口。
将输液针插入左心室。注入 20 毫升预冷盐水,然后注入 20 毫升冰镇的 4% 多聚甲醛溶液。现在沿着从颈部到鼻子的中线切开一个切口,去除皮肤并露出头骨。
使用镊子或剪刀清除颅骨上的残留肌肉。将细剪刀的一根刀片的尖端放在枕骨大孔和大脑之间,锋利的边缘朝向中矢状缝线喙端的骨头。沿着中矢状缝合线轻轻滑动并切开颅骨。
使用镊子切除颅骨,露出大脑。打开旋转式切片机低温恒温器后,将腔室温度设置为零下 20 摄氏度。倒入一点光学切割温度或 OCT 化合物,以均匀地覆盖试样盘的表面。
将标本盘放入冷冻室中,让 OCT 凝固。将圆盘连接到标本头上。然后,将刀片靠近块并修剪 OCT 块以使平面平行于圆盘。
使用剃须刀片,在远离注射部位的冠状方向上切开大脑,在脑切片模具中。将包含注射部位的脑组织,切口面朝下,放在 OCT 平面上。将 OCT 倒入大脑中,然后将圆盘放入冷冻室中,让标本块凝固。
修剪试样块,直到接近目标区域,并从注射部位水平切取几个部分。使用冷冻的小书写刷将冠状脑切片收集到含有室温PBS的六孔板中。用刷子从六孔板中取出大脑部分,然后将它们放在载玻片上。
干燥后,目视观察大脑部分的注射区域。