Inoculeer om te beginnen een enkele OP50-kolonie in vijf milliliter LB met ampicilline en amfotericine B en incubeer gedurende ongeveer zes uur bij 37 graden Celsius in een bacteriële shaker. Zodra de cultuur troebel wordt, verdunt u de pre-inoculumcultuur van OP50 met 1 tot 2.000 in 250 milliliter TB met ampicilline en glycerol. Breng vervolgens de OP50 vloeibare cultuur over in een steriele centrifugatiebuis.
Centrifugeer de buis gedurende 15 minuten bij 3, 100 G in een tafelcentrifuge bij vier graden Celsius. Gooi het supernatans weg en resuspendeer de OP50-pellet in steriel water voordat u opnieuw centrifugeert. Gooi na de tweede wasbeurt het supernatans weg en resuspendeer de OP50-pellet in steriel water tot een volume van 50 milliliter.
Breng het over in een voorgewogen conische buis van 50 milliliter. Centrifugeer de buis gedurende 20 minuten om de OP50 te pelleteren. Verwijder aan het einde van het centrifugeren voorzichtig alle resterende restanten en zorg ervoor dat er geen water in de buis achterblijft.
Bereken het gewicht van de pellet door het gewicht van de lege centrifugatiebuis af te trekken van het gewicht van de centrifugatiebuis met de pellet. Resuspendeer de OP50-pellet grondig in S-complete buffer om een concentratie van 100 milligram per milliliter te bereiken. Test de OP50-suspensie op een agarplaat om te controleren op eventuele verontreiniging.
Bewaar de OP50 suspensie in een S-complete buffer bij vier graden Celsius.