בתור התחלה, יש לחסן מושבה אחת של OP50 בחמישה מיליליטר של LB עם אמפיצילין ואמפוטריצין B ולדגור במשך כשש שעות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס בשייקר חיידקי. ברגע שהתרבית נעשית מעוננת, דללו את תרבית הפרה-אינוקולום של OP50 ב-1 עד 2, 000 ב-250 מיליליטר שחפת עם אמפיצילין וגליצרול. לאחר מכן העבירו את התרבית הנוזלית OP50 לצינור צנטריפוגה סטרילי.
צנטריפוגה את הצינור במשך 15 דקות ב 3, 100 G בצנטריפוגה שולחנית בארבע מעלות צלזיוס. יש להשליך את הסופרנאטנט ולהשהות מחדש את כדורי OP50 במים סטריליים לפני הצנטינג. לאחר השטיפה השנייה, יש להשליך את הסופרנאטנט ולהשהות מחדש את כדורית OP50 במים סטריליים לנפח של 50 מיליליטר.
מעבירים אותו לצינור חרוטי 50 מיליליטר במשקל מראש. צנטריפוגה את הצינור למשך 20 דקות כדי להניע את OP50. בסוף הצנטריפוגה, הסר בזהירות את כל הסופרנאטנט שנותר, וודא שלא נותרו מים בצינור.
חישוב משקל הגלולה על ידי הפחתת משקל צינור הצנטריפוגה הריק ממשקל צינור הצנטריפוגה עם הכדור. השהה מחדש ביסודיות את גלולת OP50 במאגר S-complete כדי להשיג ריכוז של 100 מיליגרם למיליליטר. בדוק את מתלה OP50 על צלחת אגר כדי לבדוק אם יש זיהום.
אחסנו את מתלי OP50 במאגר S-Complete בארבע מעלות צלזיוס.
