Для начала инокулируйте одну колонию OP50 в пять миллилитров LB с ампициллином и амфотерицином B и инкубируйте в течение примерно шести часов при температуре 37 градусов Цельсия в бактериальном шейкере. Как только культура помутнеет, разведите прединокулятную культуру OP50 в соотношении от 1 до 2000 мл ТБ с ампициллином и глицерином. Затем переложите жидкую культуру OP50 в стерильную центрифужную пробирку.
Центрифугируйте пробирку в течение 15 минут при 3, 100 G в настольной центрифуге при четырех градусах Цельсия. Выбросьте надосадочную жидкость и повторно суспендируйте гранулу OP50 в стерильной воде перед рецентрифугацией. После второй промывки выбросьте надосадочную жидкость и повторно суспендируйте гранулу OP50 в стерильной воде до объема 50 миллилитров.
Переложите его в предварительно взвешенную 50 миллилитровую коническую трубку. Центрифугируйте пробирку в течение 20 минут, чтобы гранулировать OP50. В конце центрифугирования осторожно удалите всю оставшуюся надосадочную жидкость, следя за тем, чтобы в пробирке не осталось воды.
Рассчитайте вес гранулы, вычитая вес пустой центрифужной трубки из веса центрифужной трубки с гранулой. Тщательно суспендируйте гранулу OP50 в буфере S-complete до достижения концентрации 100 миллиграммов на миллилитр. Проверьте суспензию OP50 на агаровой пластине, чтобы проверить наличие загрязнений.
Храните суспензию OP50 в буфере S-complete при температуре четыре градуса Цельсия.
