Per iniziare, incubare le cellule di medulloblastoma indotte da ferroptosi con il corpo PC-11 e rimuovere la soluzione colorante sotto una cappa laminare. Dopo aver lavato le cellule con due millilitri di PBS, incubare le cellule con 150 microlitri di un reagente di dissociazione cellulare. Per raccogliere meccanicamente le cellule, aggiungere 250 microlitri di tampone per citometria a flusso e picchiettare delicatamente la piastra.
Quindi, trasferire le cellule in una provetta per citometria a flusso etichettata con un tappo filtrante. Quindi, accendi la macchina FACS. Crea un nuovo esperimento e scegli il filtro FITC e il laser a 488 nanometri.
In Visualizza dati, selezionare la dimensione della cella maggiore di 12 micrometri e impostare il grafico a punti. Quindi aggiungere un nuovo istogramma del grafico con FITC-A sull'asse e sulla scala logaritmica. Quindi, vorticare il campione prelevato nella provetta e caricarlo nella macchina FACS.
Infine, registra 10.000 eventi di singoletto di dispersione in avanti. Per colorare le cellule morte, aggiungere una soluzione di ioduro di propidio appena prima dell'analisi FACS. Analisi in citometria a flusso dell'idroperossidazione lipidica, induzione verificata della ferroptosi in cellule di medulloblastoma trattate con l'erastina.