preparing the recording electrodes and drosophila for analyzing responses of taste neurons

A Novel Method for Enhanced Analysis of Insect Taste Neuron Activity

Insects, including drosophilid flies, are endowed with a sophisticated taste system that enables them to extract complex chemical information from their surroundings. This system allows them to discern the chemical composition of various substances, distinguishing between those that are nutritious and those that are harmful1,2.
At the core of this system are specialized structures known as taste hairs or sensilla, strategically located on various body parts. In drosophilid flies, these sensilla are located on the labellum, which is the major taste organ of the fly head1,2,3,4, as well as on the legs and wings1,2,5,6. The labellum is located at the tip of the proboscis and contains two lobes4,7,8. Each lobe is covered with 31 taste sensilla categorized as short, long, and intermediate4,7,8. These sensilla each house 2-4 taste neurons1,2,9,10. These taste neurons express members of at least four different gene families, namely the Gustatory receptor (Gr), Ionotropic receptor (Ir), Pickpocket (Ppk), and Transient receptor potential (Trp) genes1,2,11,12,13. This diversity of receptors and channels equips insects with the ability to recognize a wide array of chemical compounds, including both nonvolatile and volatile cues1,2,14.
For over 50 years, scientists have quantified the response of taste neurons and their receptors using a technique called tip recording3,4,6,8,13,15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,25,26,27,28, 
29,30,31,32,33,34,35. However, this method has major limitations. First, neural activity can be measured only during contact with the stimulus, and not before or after contact. This limitation precludes the measurement of spontaneous spiking activity and prevents the measurement of OFF responses. Second, only tastants that are soluble in aqueous solutions can be tested.
These limitations can be overcome by a rarely used alternative electrophysiological technique called &#34;base recording.&#34; Here we describe this technique, which we have adapted from a method used by Marion-Poll and colleagues24, and show the crucial taste coding features that it can now conveniently measure14.

Author Spotlight: Advances in Chemoreception &#8211; From Insect Odor Receptors to Non-Coding RNAs

Enregistrement de base : une technique d’analyse des réponses des neurones gustatifs chez la drosophile

Préparation des électrodes d’enregistrement et de la drosophile pour l’analyse des réponses des neurones gustatifs

Commencez par placer 10 à 15 mouches drosophiles nouvellement apparues dans des flacons de culture standard frais. Maintenez ces flacons à 25 degrés Celsius et à 60 % d’humidité relative dans un cycle de lumière et d’obscurité de 12 heures. Pour préparer un capillaire en verre pour retenir le stimulus, sélectionnez un capillaire en verre borosilicate et utilisez un instrument extracteur de pipette pour tirer le capillaire en verre.Ensuite, prenez des tiges de tungstène pour les électrodes de référence et d’enregistrement. Trempez ces électrodes à plusieurs reprises pendant plusieurs secondes dans une solution de nitrate de potassium à 10 % ou une solution d’hydroxyde de potassium pour les aiguiser jusqu’à un diamètre de pointe d’un micromètre. Pour aspirer une seule mouche du flacon dans un aspirateur, retirez soigneusement l’aspirateur et placez un doigt sur l’extrémité de l’aspirateur pour piéger la mouche.Maintenant, gardez l’extrémité de l’aspirateur dans l’embout de pipette de 200 microlitres et utilisez l’extrémité pour pousser la mouche vers l’avant la tête la première vers l’extrémité étroite de l’embout de la pipette. À l’aide d’une lame de rasoir, coupez les deux extrémités de la pointe de la pipette, à l’avant et à l’arrière de la mouche. À l’aide d’argile ou d’un petit morceau de coton, poussez davantage la mouche vers l’avant jusqu’à ce que la moitié de sa tête dépasse de l’extrémité de la pointe de la pipette taillée.Utilisez une pince pour exposer doucement le labelle à l’avant de la tête. À l’aide d’un microscope stéréoscopique, placez le labelle latéralement sur une lamelle, en veillant à ce qu’un lobe avec ses 31 sensilles gustatives soit exposé.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Preparing the Recording Electrodes and Drosophila for Analyzing Responses of Taste Neurons

Base Recording: A Technique for Analyzing Responses of Taste Neurons in Drosophila

Insects taste the external world through taste hairs, or sensilla, that have pores at their tips. When a sensillum comes into contact with a potential ...

Recherche

Neurosciences

Base Recording from Taste Sensilla of Drosophila for Analyzing Responses of Taste Neurons

Enregistrement de base à partir de la sensille gustative de la drosophile pour l’analyse des réponses des neurones gustatifs