preparing the recording electrodes and drosophila for analyzing responses of taste neurons

A Novel Method for Enhanced Analysis of Insect Taste Neuron Activity

Insects, including drosophilid flies, are endowed with a sophisticated taste system that enables them to extract complex chemical information from their surroundings. This system allows them to discern the chemical composition of various substances, distinguishing between those that are nutritious and those that are harmful1,2.
At the core of this system are specialized structures known as taste hairs or sensilla, strategically located on various body parts. In drosophilid flies, these sensilla are located on the labellum, which is the major taste organ of the fly head1,2,3,4, as well as on the legs and wings1,2,5,6. The labellum is located at the tip of the proboscis and contains two lobes4,7,8. Each lobe is covered with 31 taste sensilla categorized as short, long, and intermediate4,7,8. These sensilla each house 2-4 taste neurons1,2,9,10. These taste neurons express members of at least four different gene families, namely the Gustatory receptor (Gr), Ionotropic receptor (Ir), Pickpocket (Ppk), and Transient receptor potential (Trp) genes1,2,11,12,13. This diversity of receptors and channels equips insects with the ability to recognize a wide array of chemical compounds, including both nonvolatile and volatile cues1,2,14.
For over 50 years, scientists have quantified the response of taste neurons and their receptors using a technique called tip recording3,4,6,8,13,15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,25,26,27,28, 
29,30,31,32,33,34,35. However, this method has major limitations. First, neural activity can be measured only during contact with the stimulus, and not before or after contact. This limitation precludes the measurement of spontaneous spiking activity and prevents the measurement of OFF responses. Second, only tastants that are soluble in aqueous solutions can be tested.
These limitations can be overcome by a rarely used alternative electrophysiological technique called &#34;base recording.&#34; Here we describe this technique, which we have adapted from a method used by Marion-Poll and colleagues24, and show the crucial taste coding features that it can now conveniently measure14.

Author Spotlight: Advances in Chemoreception &#8211; From Insect Odor Receptors to Non-Coding RNAs

염기 기록: 초파리에서 미각 뉴런의 반응을 분석하는 기법

미각 뉴런의 반응을 분석하기 위한 기록 전극 및 초파리의 준비

10-15마리의 새로 출현한 초파리를 새로운 표준 배양 바이알에 넣는 것으로 시작합니다. 이 바이알은 섭씨 25도, 상대 습도 60%에서 12시간 명암 주기로 유지합니다. 자극을 유지하기 위한 유리 모세관을 준비하려면 붕규산 유리 모세관을 선택하고 피펫 풀러 기기를 사용하여 유리 모세관을 당깁니다.그런 다음 참조 전극과 기록 전극 모두에 텅스텐 막대를 사용하십시오. 이 전극을 10% 질산칼륨 용액 또는 수산화칼륨 용액에 몇 초 동안 반복적으로 담궈 1마이크로미터 팁 직경으로 날카롭게 합니다. 바이알에서 파리 한 마리를 흡인기로 끌어들이려면 흡인기를 조심스럽게 빼내고 흡인기 끝에 손가락을 올려 파리를 가둡니다.이제 흡입기의 끝을 200마이크로리터 피펫 팁에 유지하고 끝을 사용하여 플라이를 피펫 팁의 좁은 끝을 향해 머리부터 앞으로 밉니다. 면도날을 사용하여 피펫 팁의 양쪽 끝, 플라이의 앞쪽과 뒤쪽을 자릅니다. 점토나 작은 면봉을 사용하여 머리의 절반이 다듬어진 피펫 팁 끝에서 튀어나올 때까지 파리를 앞으로 더 밉니다.집게를 사용하여 머리 앞쪽의 라벨럼을 부드럽게 노출시킵니다. 실체 현미경 아래에서 라벨럼을 커버 슬립에 측면으로 배치하여 31개의 맛 감각이 있는 하나의 로브가 노출되도록 합니다.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Preparing the Recording Electrodes and Drosophila for Analyzing Responses of Taste Neurons

Base Recording: A Technique for Analyzing Responses of Taste Neurons in Drosophila

Insects taste the external world through taste hairs, or sensilla, that have pores at their tips. When a sensillum comes into contact with a potential ...

연구

신경과학

Base Recording from Taste Sensilla of Drosophila for Analyzing Responses of Taste Neurons

미각 뉴런의 반응을 분석하기 위한 Taste Sensilla of Drosophila 의 기본 기록