preparing the recording electrodes and drosophila for analyzing responses of taste neurons

A Novel Method for Enhanced Analysis of Insect Taste Neuron Activity

Insects, including drosophilid flies, are endowed with a sophisticated taste system that enables them to extract complex chemical information from their surroundings. This system allows them to discern the chemical composition of various substances, distinguishing between those that are nutritious and those that are harmful1,2.
At the core of this system are specialized structures known as taste hairs or sensilla, strategically located on various body parts. In drosophilid flies, these sensilla are located on the labellum, which is the major taste organ of the fly head1,2,3,4, as well as on the legs and wings1,2,5,6. The labellum is located at the tip of the proboscis and contains two lobes4,7,8. Each lobe is covered with 31 taste sensilla categorized as short, long, and intermediate4,7,8. These sensilla each house 2-4 taste neurons1,2,9,10. These taste neurons express members of at least four different gene families, namely the Gustatory receptor (Gr), Ionotropic receptor (Ir), Pickpocket (Ppk), and Transient receptor potential (Trp) genes1,2,11,12,13. This diversity of receptors and channels equips insects with the ability to recognize a wide array of chemical compounds, including both nonvolatile and volatile cues1,2,14.
For over 50 years, scientists have quantified the response of taste neurons and their receptors using a technique called tip recording3,4,6,8,13,15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,25,26,27,28, 
29,30,31,32,33,34,35. However, this method has major limitations. First, neural activity can be measured only during contact with the stimulus, and not before or after contact. This limitation precludes the measurement of spontaneous spiking activity and prevents the measurement of OFF responses. Second, only tastants that are soluble in aqueous solutions can be tested.
These limitations can be overcome by a rarely used alternative electrophysiological technique called &#34;base recording.&#34; Here we describe this technique, which we have adapted from a method used by Marion-Poll and colleagues24, and show the crucial taste coding features that it can now conveniently measure14.

Author Spotlight: Advances in Chemoreception &#8211; From Insect Odor Receptors to Non-Coding RNAs

Базовая запись: метод анализа реакций вкусовых нейронов у дрозофил

Подготовка записывающих электродов и дрозофил к анализу реакций вкусовых нейронов

Начните с размещения от 10 до 15 недавно появившихся мух дрозофилы в свежие стандартные флаконы для культуры. Поддерживайте эти флаконы при температуре 25 градусов Цельсия и относительной влажности 60% в течение 12-часового цикла света и темноты. Чтобы подготовить стеклянный капилляр для удержания стимула, выберите боросиликатный стеклянный капилляр и используйте инструмент для вытягивания стеклянного капилляра с помощью пипетки.Затем возьмите вольфрамовые стержни как для сравнения, так и для записывающих электродов. Несколько раз опустите эти электроды на несколько секунд либо в 10%-ный раствор нитрата калия, либо в раствор гидроксида калия, чтобы заточить их до диаметра наконечника в один микрометр. Чтобы втянуть одну муху из флакона в аспиратор, осторожно извлеките аспиратор и поместите палец на конец аспиратора, чтобы поймать муху.Теперь держите конец аспиратора в наконечнике пипетки объемом 200 микролитров и используйте конец, чтобы протолкнуть муху вперед головой вперед к узкому концу наконечника пипетки. Лезвием бритвы обрежьте оба конца наконечника пипетки, спереди и сзади от мухи. С помощью пластилина или небольшого кусочка ваты далее толкайте муху вперед до тех пор, пока половина ее головы не будет выступать из конца обрезанного кончика пипетки.Используйте щипцы, чтобы аккуратно обнажить лабеллум в передней части головы. Под стереомикроскопом расположите лабеллум сбоку на покровном листе, убедившись, что одна доля с его 31 вкусовой сенсиллой обнажена.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Preparing the Recording Electrodes and Drosophila for Analyzing Responses of Taste Neurons

Base Recording: A Technique for Analyzing Responses of Taste Neurons in Drosophila

Insects taste the external world through taste hairs, or sensilla, that have pores at their tips. When a sensillum comes into contact with a potential ...

Base Recording from Taste Sensilla of Drosophila for Analyzing Responses of Taste Neurons

Базовая запись вкусовой сенсиллы дрозофилы для анализа реакций вкусовых нейронов