Pour commencer, prenez le tube de GUVs fraîchement récoltées. Ajoutez la solution de streptavidine et laissez-la reposer pendant 30 minutes à température ambiante. Ajoutez ensuite une micromolaire de b-disiLID à la solution GUV.
Couvrez l’échantillon de papier d’aluminium et gardez-le dans l’obscurité. Prétraitez une chambre à fond en verre de 18 puits avec 150 microlitres de solution BSA pendant 10 minutes. Retirez ensuite la solution BSA et lavez les puits trois fois avec 150 microlitres d’eau.
Ensuite, ajoutez 145 microlitres de 200 mOrange-nano nanomolaires en tampon dans le puits. Ajoutez cinq microlitres de GUV décorés d’un b-disiLID à la solution. Couvrez l’échantillon d’une feuille d’aluminium et attendez environ 15 minutes que les vésicules se déposent.
Ensuite, placez la micro-lame sous le microscope confocal. Excitez l’échantillon à 552 nanomètres pour la visualisation mOrange. Et à 638 nanomètres pour le DID dans les membranes du GUV.
Les GUV mOrange-nano n’ont pas réussi à présenter de fluorescence dans l’obscurité. L’intensité mOrange quantifiée au niveau de la membrane GUV a montré un recrutement rapide et efficace des protéines avec une réversibilité totale.