Для начала возьмем тюбик свежесобранных GUV. Добавьте раствор стрептавидина и дайте настояться 30 минут при комнатной температуре. Затем добавьте в раствор GUV один микромоляр b-disiLID.
Накройте образец алюминиевой фольгой и держите его в темноте. Предварительно обработайте микрослайд 18-луночной стеклянной нижней камеры 150 микролитрами раствора БСА в течение 10 минут. Затем удалите раствор БСА и трижды промойте лунки 150 микролитрами воды.
Далее добавьте в лунку 145 микролитров 200 наномоляров mOrange-nano в буфере. Добавьте в раствор пять микролитров GUV, декорированных b-disiLID. Накройте образец алюминиевой фольгой и подождите примерно 15 минут, чтобы пузырьки осядут.
После этого поместите микропредметное стекло под конфокальный микроскоп. Возбуждайте образец на 552 нанометрах для визуализации mOrange. И на 638 нанометрах для DID в мембранах GUV.
Morange-nano GUV не смогли проявить флуоресценцию в темноте. Интенсивность mOrange, количественно определенная на мембране GUV, показала быстрый и эффективный рекрутинг белка с полной обратимостью.