Conjugatie van ACE2 en controle-antilichamen tegen magnetische microsferen om virale deeltjes van SARS-CoV-2-geïnfecteerde cellen op te vangen

Bereid om te beginnen de werkoplossing van NeutrAvidin in MES-buffer in een 1,5 milliliter laag eiwitbindende microfuge-buis. Bereid vervolgens de werkoplossing van geitenimmunoglobuline G-controle-antilichaam in MES-buffer. Draai de verdunde antilichaamoplossing in een draaikolk en centrifugeer de buis.

Neem vervolgens de Microtiterplaat met geactiveerde kralen en plaats deze 30 seconden op een magnetische plaatscheider om de kralen te immobiliseren. Terwijl de microtiterplaat nog op de magnetische scheider is geplaatst, zuigt u het supernatans op uit de met magneten geïmmobiliseerde kralen. Voeg vervolgens 100 microliter neutravidinoplossing, antilichaamoplossing en MES-buffer toe aan geschikte putjes die kralen bevatten.

Sluit de microtiterplaat af en incubeer gedurende twee uur op een orbitale shaker bij 650 RPM in het donker bij kamertemperatuur. Was vervolgens de kralen met PBST met behulp van een geautomatiseerde wasmachine. Bereid na een nacht incubatie de recombinante humane gebiotinyleerde ACE2- en biotine-werkoplossing in 10 millimolaire PBS.

Immobiliseer de microsferen op de magnetische plaatscheider gedurende 30 seconden en zuig het supernatans op uit met magneten geïmmobiliseerde microsferen, zoals eerder getoond. Verwijder de microtiterplaat van de magnetische scheider en voeg 50 microliter PBS van 10 millimolair toe aan elk putje. Voeg vervolgens 100 microliter van de gebiotinyleerde ACE2- en biotine-werkoplossing toe aan geschikte putjes die geconjugeerde neutravidin-geconjugeerde microsferen bevatten.

Sluit de microtiterplaat af en incubeer gedurende een uur op een orbitale shaker, zoals eerder getoond. Bewaar na het wassen van de microsferen de ACE2 en biotine geconjugeerde microsferen.