Conjugaison de l’ACE2 et des anticorps de contrôle aux microsphères magnétiques pour capturer les particules virales des cellules infectées par le SRAS-CoV-2

Pour commencer, préparez la solution de travail de NeutrAvidin dans un tampon MES dans un tube de microfuge à faible liaison protéique de 1,5 millilitre. Préparez ensuite la solution de travail de l’anticorps de contrôle de l’immunoglobuline G de chèvre dans le tampon MES. Vortex la solution d’anticorps diluée et centrifugez le tube.

Ensuite, prenez la plaque Microtiter contenant les billes activées et placez-la sur un séparateur de plaques magnétiques pendant 30 secondes pour immobiliser les billes. Avec la plaque de microtitration toujours positionnée sur le séparateur magnétique, aspirez le surnageant des billes immobilisées de l’aimant. Ajoutez ensuite 100 microlitres de solution de NeutrAvidin, de solution d’anticorps et de tampon MES dans les puits appropriés contenant des billes.

Scellez la plaque de microtitration et incubez pendant deux heures sur un agitateur orbital à 650 tr/min dans l’obscurité à température ambiante. Ensuite, lavez les billes avec du PBST à l’aide d’une laveuse automatisée. Après une nuit d’incubation, préparer la solution de travail humaine recombinante d’ACE2 biotinylé et de biotine dans du PBS de 10 millimolaires.

Immobilisez les microsphères sur le séparateur de plaques magnétiques pendant 30 secondes et aspirez le surnageant des microsphères immobilisées par aimant, comme indiqué précédemment. Retirez la plaque Microtiter du séparateur magnétique et ajoutez 50 microlitres de PBS de 10 millimolaires dans chaque puits. Ajoutez ensuite 100 microlitres de la solution de travail biotinylée ACE2 et biotine dans les puits appropriés contenant des microsphères conjuguées aux neutravidines.

Scellez la plaque Microtiter et incubez pendant une heure sur un agitateur orbital, comme indiqué précédemment. Après avoir lavé les microsphères, stockez les microsphères conjuguées à l’ACE2 et à la biotine.