צימוד של ACE2 ונוגדני בקרה למיקרוספרות מגנטיות כדי ללכוד חלקיקים נגיפיים מתאים נגועים ב- SARS-CoV-2

30 Views

•

02:15 min

•

January 12th, 2024

DOI :

10.3791/201600-v

January 12th, 2024

•

30 Views

Maryam Sahi¹, Sarah Andersson¹, Cecilia Mattson¹, Matilda Dale¹, Sofia Kagiolglou¹, Camilla Hofström², Helena Persson², Jonas Klingström³^,⁴, Francesca Chiodi⁵, Claudia Fredolini¹

¹Affinity Proteomics-Stockholm Unit, SciLifeLab, Division of Affinity Proteomics, Department of Protein Science, School of Engineering Sciences in Chemistry, Biotechnology and Health (CBH), KTH Royal Institute of Technology, ²Human Antibody Therapeutics Unit, SciLifeLab, Division of Drug Discovery and Development, Department of Protein Science, School of Engineering Sciences in Chemistry, Biotechnology and Health (CBH), KTH Royal Institute of Technology, ³Center for Infectious Medicine, Department of Medicine Huddinge, Karolinska Institutet, ⁴Public Health Agency of Sweden, ⁵Department of Microbiology, Tumor and Cell Biology, Karolinska Institutet

Transcript

כדי להתחיל, להכין את פתרון העבודה של NeutrAvidin במאגר MES בצינור microfuge 1.5 מיליליטר חלבון נמוך קושר. לאחר מכן להכין את פתרון העבודה של אימונוגלובולין G עז נוגדן שליטה במאגר MES. מערבלים את תמיסת הנוגדנים המדוללת, וצנטריפוגות את הצינור.

לאחר מכן, קח את צלחת Microtiter המכילה חרוזים פעילים והניחו אותה על מפריד לוחות מגנטי למשך 30 שניות כדי לשתק את החרוזים. כאשר לוח המיקרוטיטר עדיין ממוקם על המפריד המגנטי, שאפו את הסופרנאטנט מחרוזים משותקים מגנטיים. לאחר מכן הוסף 100 מיקרוליטר של תמיסת NeutrAvidin, תמיסת נוגדנים וחיץ MES לבארות מתאימות המכילות חרוזים.

אטמו את צלחת המיקרוטיטר ודגרו במשך שעתיים על שייקר מסלול ב-650 סל"ד בחושך ובטמפרטורת החדר. לאחר מכן שטפו חרוזים עם PBST באמצעות מכונת כביסה אוטומטית. לאחר דגירה של לילה, הכינו את תמיסת העבודה הרקומביננטית ACE2 וביוטין אנושית ב-PBS של 10 מילימולרי.

לשתק את המיקרוספרות על מפריד הלוחות המגנטי למשך 30 שניות, ולשאוף את הסופרנאטנט ממיקרוספרות משותקות מגנטיות, כפי שהוצג קודם לכן. הסר את צלחת Microtiter מן המפריד המגנטי, ולהוסיף 50 מיקרוליטר של PBS 10 מילימולרי לכל באר. לאחר מכן הוסף 100 מיקרוליטר של תמיסת העבודה ACE2 וביוטין ביוטינילציה לבארות מתאימות המכילות מיקרוספרות מצומדות של נויטראבידין.

אטמו את צלחת המיקרוטייטר, ודגרו במשך שעה על שייקר מסלולי, כפי שהוצג קודם לכן. לאחר שטיפת המיקרוספרות, אחסנו את המיקרוספרות המצומדות ACE2 וביוטין.

Explore More Videos

ACE2

Control Antibodies

Magnetic Microspheres