Coniugazione di ACE2 e anticorpi di controllo contro le microsfere magnetiche per catturare le particelle virali dalle cellule infette da SARS-CoV-2

Per iniziare, preparare la soluzione di lavoro di NeutrAvidin in tampone MES in una provetta per microfuge a basso contenuto proteico da 1,5 millilitri. Quindi preparare la soluzione di lavoro dell'anticorpo di controllo dell'immunoglobulina G di capra nel tampone MES. Agitare la soluzione di anticorpi diluiti e centrifugare la provetta.

Quindi, prendere la piastra per microtitolazione contenente le perle attivate e posizionarla su un separatore di piastre magnetiche per 30 secondi per immobilizzare le perline. Con la piastra per microtitolazione ancora posizionata sul separatore magnetico, aspirare il surnatante dalle perle immobilizzate con il magnete. Quindi aggiungere 100 microlitri di soluzione di NeutrAvidin, soluzione di anticorpi e tampone MES in pozzetti appropriati contenenti perline.

Sigillare la piastra per microtitolazione e incubare per due ore su un agitatore orbitale a 650 giri/min al buio a temperatura ambiente. Quindi lavare le perline con PBST utilizzando una lavatrice automatica. Dopo l'incubazione notturna, preparare l'ACE2 biotinilato umano ricombinante e la soluzione di lavoro della biotina in PBS da 10 millimolari.

Immobilizzare le microsfere sul separatore a piastre magnetiche per 30 secondi e aspirare il surnatante dalle microsfere immobilizzate con magnete, come mostrato in precedenza. Rimuovere la piastra per microtitolazione dal separatore magnetico e aggiungere 50 microlitri di PBS da 10 millimolari a ciascun pozzetto. Quindi aggiungere 100 microlitri di ACE2 biotinilato e soluzione di lavoro della biotina in pozzetti appropriati contenenti microsfere coniugate di NeutrAvidin.

Sigillare la piastra per microtitolazione e incubare per un'ora su un agitatore orbitale, come mostrato in precedenza. Dopo aver lavato le microsfere, conservare le microsfere coniugate con ACE2 e biotina.