SARS-CoV-2 감염 세포에서 바이러스 입자를 포획하기 위해 ACE2 및 제어 항체를 자기 마이크로스피어에 접합

먼저 1.5밀리리터 저단백질 결합 마이크로퓨지 튜브의 MES 완충액에서 NeutrAvidin의 작업 용액을 준비합니다. 그런 다음 MES 완충액에서 염소 면역글로불린 G 대조 항체의 작업 용액을 준비합니다. 희석된 항체 용액을 소용돌이치게 하고 튜브를 원심분리합니다.

다음으로, 활성 비드가 들어있는 Microtiter 플레이트를 가져 와서 30 초 동안 자기 플레이트 분리기에 올려 비드를 고정시킵니다. Microtiter 플레이트를 자기 분리기에 계속 배치한 상태에서 자석이 고정된 비드에서 상층액을 흡입합니다. 그런 다음 100마이크로리터의 NeutrAvidin 용액, 항체 용액 및 MES 완충액을 비드가 포함된 적절한 웰에 추가합니다.

Microtiter 플레이트를 밀봉하고 실온의 어두운 곳에서 650RPM의 궤도 쉐이커에서 2시간 동안 배양합니다. 그런 다음 자동 세척기를 사용하여 PBST로 비드를 세척합니다. 하룻밤 배양 후 재조합 인간 비오틴화 ACE2 및 비오틴 작업 용액을 10밀리몰 PBS에서 준비합니다.

마그네틱 플레이트 분리기에 마이크로스피어를 30초 동안 고정시키고 앞서 표시된 것처럼 자석 고정 마이크로스피어에서 상층액을 흡입합니다. 자기 분리기에서 마이크로타이터 플레이트를 제거하고 각 웰에 50마이크로리터의 10밀리몰 PBS를 추가합니다. 그런 다음 100 마이크로리터의 비오틴화 ACE2 및 비오틴 작업 용액을 NeutrAvidin 복합 마이크로스피어가 포함된 적절한 웰에 추가합니다.

Microtiter 플레이트를 밀봉하고 앞서 표시된 대로 오비탈 셰이커에서 1시간 동안 배양합니다. 마이크로스피어를 세척한 후 ACE2와 비오틴 복합 마이크로스피어를 보관합니다.