Konjugering av ACE2 og kontrollantistoffer mot magnetiske mikrosfærer for å fange opp virale partikler fra SARS-CoV-2-infiserte celler

For å begynne, klargjør arbeidsløsningen av NeutrAvidin i MES-buffer i et 1,5 milliliter lavproteinbindende mikrofugerør. Forbered deretter arbeidsløsningen av geiteimmunglobulin G-kontrollantistoff i MES-buffer. Virvel den fortynnede antistoffløsningen, og sentrifuger røret.

Deretter tar du mikrotiterplaten som inneholder aktiverte perler og plasserer den på en magnetisk plateseparator i 30 sekunder for å immobilisere perlene. Med mikrotiterplaten fortsatt plassert på den magnetiske separatoren, aspirer supernatanten fra magnetimmobiliserte perler. Tilsett deretter 100 mikroliter NeutrAvidin-løsning, antistoffløsning og MES-buffer til passende brønner som inneholder perler.

Forsegl mikrotiterplaten og inkuber i to timer på en orbital rister ved 650 RPM i mørket ved romtemperatur. Vask deretter perler med PBST ved hjelp av en automatisert vaskemaskin. Etter inkubasjon over natten, tilbered den rekombinante humane biotinylerte ACE2- og biotinarbeidsløsningen i 10 millimolar PBS.

Immobiliser mikrosfærene på magnetplateseparatoren i 30 sekunder, og aspirer supernatanten fra magnetimmobiliserte mikrosfærer, som vist tidligere. Fjern mikrotiterplaten fra magnetseparatoren, og tilsett 50 mikroliter 10 millimolar PBS til hver brønn. Tilsett deretter 100 mikroliter av den biotinylerte ACE2- og biotinarbeidsløsningen til passende brønner som inneholder NeutrAvidin-konjugerte mikrosfærer.

Forsegl mikrotiterplaten, og inkuber i en time på en orbital shaker, som vist tidligere. Etter å ha vasket mikrosfærene, oppbevar ACE2- og biotinkonjugerte mikrosfærer.