Конъюгация ACE2 и контрольных антител к магнитным микросферам для захвата вирусных частиц из клеток, инфицированных SARS-CoV-2

Для начала приготовьте рабочий раствор NeutrAvidin в MES-буфере в 1,5-миллилитровой микрофуге с низким связыванием белков. Затем готовят рабочий раствор козьего иммуноглобулина G контрольного антитела в буфере MES. Ввергните в вихрь разведенный раствор антитела, и центрифугируйте пробирку.

Затем возьмите пластину для микротитрования, содержащую активированные бусины, и поместите ее на магнитный разделитель пластин на 30 секунд, чтобы обездвижить бусины. Пока микротитировальная пластина все еще находится на магнитном сепараторе, отаскуйте надосадочную жидкость из магнитных иммобилизованных шариков. Затем добавьте 100 микролитров раствора NeutrAvidin, раствор антитела и буфер MES в соответствующие лунки, содержащие гранулы.

Закройте планшет с микротитром и инкубируйте в течение двух часов на орбитальном шейкере со скоростью 650 об/мин в темноте при комнатной температуре. Затем промыть бусины с помощью PBST с помощью автоматической шайбы. После ночной инкубации приготовьте рекомбинантный человеческий биотинилированный ACE2 и рабочий раствор биотина в 10 миллимолярных PBS.

Иммобилизуйте микросферы на магнитном пластинчатом сепараторе в течение 30 секунд и аспирируйте надосадочную жидкость из магнитных иммобилизованных микросфер, как было показано ранее. Снимите микротитровую пластину с магнитного сепаратора и добавьте в каждую лунку по 50 микролитров 10 миллимолярных PBS. Затем добавьте 100 микролитров биотинилированного ACE2 и рабочего раствора биотина в соответствующие лунки, содержащие сопряженные микросферы NeutrAvidin.

Запечатайте планшет с микротитром и инкубируйте в течение часа на орбитальном шейкере, как показано ранее. После промывки микросфер храните микросферы, сопряженные с ACE2 и биотином.