Для начала подготовьте все необходимые материалы для проведения анализа. Для стандартов GSH добавьте 40 микролитров общего буфера глутатиона в каждую лунку. Затем аспирируйте среду из каждой лунки планшета, содержащего клеточную гранулу, и трижды промойте ячейку ледяным PBS.
Приготовьте калибровочный диапазон с 10 микролитрами глутатиона и дважды дистиллированной водой в виде заготовки в трех экземплярах. Для количественного определения желаемой цели инкубируйте промытые клетки с соответствующими смесями в орбитальном вибростенде со скоростью 300 об/мин в течение двух минут. Затем в каждую лунку добавьте по пять микролитров 0,01 молярного триса, 2-раствор карбоксиэтилфосфина, и снова инкубируйте в течение 10 минут.
Затем центрифугируйте планшет при 200 G в течение пяти минут и переведите 25 микролитров из каждой лунки для образца в отдельную прозрачную 96-луночную пластину для количественного определения белка. Затем добавьте 170 микролитров рабочего раствора ортофтальдегида в каждую лунку, содержащую 30 микролитров образцов. Чтобы защитить пластину от света, тщательно накройте ее фольгой и выдержите в орбитальном шейкере в течение 15 минут.
Наконец, считайте флуоресценцию с помощью планшетного ридера с возбуждением 340 нанометров и излучением 450 нанометров. Клетки А549, обработанные различными наноматериалами, показали различные соотношения дисульфидов глутатиона в этом анализе, и наибольшее значение наблюдалось для клеток, обработанных 125 микрограммами на миллилитр серебра.