Monster- en mastermixvoorbereiding voor telomeerlengtemeting met behulp van monochrome multiplex kwantitatieve PCR (MMqPCR)

Begin met het toevoegen van genomische DNA-monsters geëxtraheerd uit perifere mononucleaire bloedcellen aan respectievelijk PCR-strips A, B en C. Vervolgens draai het ontdooide gecontroleerde DNA-aliquot gedurende 30 seconden. Na het kort centrifugeren van de buis, zuigt u het volledige volume op in de eerste buis in de standaard gebogen PCR-buisstrip.

Voeg vervolgens 70 microliter water van PCR-kwaliteit toe aan de tweede door acht buizen van de standaard curve PCR-strip. Resuspendeer vervolgens controle-DNA in de eerste buis en zuig 70 microliter op in de tweede buis. Wacht 30 seconden en suspendeer de oplossing opnieuw in de tweede buis.

Verzamel de mastermix-reagentia en laat ze op kamertemperatuur komen in de PCR-kap. Voeg vervolgens een microliter van de cybergroene aliquot toe aan de bufferaliquot. Draai alle aliquots gedurende 10 seconden en centrifugeer ze gedurende vijf seconden.

Voeg vervolgens de aangegeven hoeveelheden van alle mastermix-reagentia en primers toe aan de betaïnebuis van vijf milliliter. Nadat u het DNA-polymerase van min 20 graden Celsius hebt verwijderd, draait u het gedurende 10 seconden en centrifugeert u het vervolgens gedurende vijf seconden. Eenmaal gecentrifugeerd, voeg je langzaam 128 microliter toe aan de mastermix.

Draai de mastermixbuis van vijf milliliter gedurende 30 seconden en zet hem dan opzij.