تحضير صفيحة 96 بئرا لتفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي أحادي اللون (MMqPCR) لقياس طول التيلومير

للبدء ، ضع لوحين من 96 بئرا ، وحوض تحميل ، وأطراف ماصة متعددة القنوات داخل غطاء PCR. بعد تسمية كل لوحة ، أدر اللوحة 1 180 درجة بحيث تكون أرقام الأعمدة مقلوبة مع ترك اللوحة 2 في مواجهة الفني. ثم صب أنبوب خمسة ملليلتر من المزيج الرئيسي MM qPCR المحضر في حوض التحميل.

استخدم طرف ماصة لضمان نقل كل المحلول من الأنبوب. قم بتوصيل أطراف بالماصة متعددة القنوات ، واضغط على قاعدة كل طرف لتأمين ختم محكم. باستخدام السحب العكسي ، قم بتوزيع المزيج الرئيسي إما في جميع الأعمدة الزوجية أو الفردية أولا ، بالتناوب بين اللوحين.

بعد دوامة شرائط PCR والطرد المركزي ، رتبها في رف الأنبوب بالترتيب الذي سيتم وضعها به على الألواح. الآن أدر كلتا اللوحتين 180 درجة بحيث يتم عكس أرقام الأعمدة بالنسبة للفني. استخدم الماصة متعددة القنوات لإعادة تعليق المحاليل في شرائط تفاعل البوليميراز المتسلسل.

باستخدام السحب العكسي ، املأ الأعمدة الثلاثة الأولى من كل لوحة بشريط PCR A ، بالتناوب بين الأعمدة الزوجية أو الفردية مثل موضع المزيج الرئيسي. باستخدام ماصة سعة 200 ميكرولتر مضبوطة على 90 ميكرولتر ، أعد تعليق أنبوب التخفيف القياسي السابع تماما في شريط PCR S واملأ الأعمدة من الرابع إلى السادس على الألواح. بعد ملء الألواح ، اضغط عليها برفق على سطح الطاولة لضمان استقرار السائل في الآبار في الأسفل.

ثم قم بتغطية الأجزاء العلوية من الألواح بأفلام مانعة للتسرب ، مع الضغط لأسفل على جميع حواف الفيلم بأطراف الأصابع لضمان إحكام الغلق. لخلط محتويات الألواح ، قم بتدويرها على سطح غطاء المحرك لمدة 30 ثانية. ثم ضع الألواح المختومة في دوار اللوحة لمدة دقيقتين مع فتحات البئر التي تواجه المركز.

الآن ضع الألواح في جهاز التدوير الحراري للتأكد من أن أرقام الأعمدة مقروءة. نظف الجزء العلوي من كل لوحة بمنديل نظيف قبل إغلاق الجزء العلوي من جهاز التدوير الحراري. ثم انقر فوق الزر Start Run الموجود في برنامج thermocycler لكلا الجهازين.

عند المطالبة، أدخل عنوانا لملفات التحليل، والذي سيتم استخدامه لتسمية البيانات من هذه التجربة وتعقبها.