用于端粒长度测量的单色多重定量 PCR （MMqPCR） 的 96 孔板的制备

首先，将两个 96 孔板、一个加载槽和多通道移液器吸头放入 PCR 通风橱内。标记每个板后，将板 1 旋转 180 度，使列号倒置，同时让板 2 面向技术人员。然后将制备好的 5 ml MM qPCR 预混液管倒入上样槽中。

使用移液器吸头确保从试管中转移所有溶液。将吸头连接到多通道移液器上，按压每个吸头的底部以确保紧密密封。使用反向移液，先将预混液分装到全偶数列或全奇数列中，在两个板之间交替分配。

涡旋和离心 PCR 条后，按照它们在板上的顺序将它们排列在试管架中。现在将两个板旋转 180 度，使列号相对于技术人员相反。使用多通道移液器重悬 PCR 试纸条中的溶液。

使用反向移液，用 PCR 联排 A 填充每个板的前三列，在偶数列或奇数列之间交替，就像预混液放置一样。使用设置为 90 μL 的 200 微升移液器，将第七个标准稀释管彻底重悬于 PCR 联排 S 中，并填充板上的第四至第六列。填充板后，在工作台顶部轻轻敲击它们，以确保孔中的液体沉淀在底部。

然后用密封膜覆盖板的顶部，用指尖按压薄膜的所有边缘，以确保紧密密封。要混合板的内容物，请在引擎盖顶部旋转 30 秒。然后将密封板放入板旋转器中 2 分钟，使孔口朝向中心。

现在将板放入热循环仪中，确保列号清晰可辨。在关闭热循环仪顶部之前，用干净的纸巾清洁每个板的顶部。然后单击两台机器的热循环仪软件上的 Start Run 按钮。

出现提示时，输入分析文件的标题，该标题将用于标记和跟踪此实验中的数据。