Plaats om te beginnen twee platen met 96 putjes, een laadbak en meerkanaals pipetpunten in de PCR-kap. Draai na het labelen van elke plaat plaat 1 180 graden zodat de kolomnummers ondersteboven staan terwijl u plaat 2 naar de technicus laat wijzen. Giet vervolgens de buis van vijf milliliter van de bereide MM qPCR-mastermix in de laadbak.
Gebruik een pipetpunt om ervoor te zorgen dat alle oplossing uit de buis wordt overgebracht. Bevestig de tips aan de meerkanaalspipet en druk op de basis van elke pipet om een goede afdichting te garanderen. Gebruik omgekeerd pipetteren en verdeel het hoofdmengsel eerst in alle even of alle oneven kolommen, afwisselend tussen de twee platen.
Na het vortexen en centrifugeren van de PCR-strips, rangschikt u ze in het buizenrek in de volgorde waarin ze op de platen worden geplaatst. Draai nu beide platen 180 graden zodat de kolomnummers omgedraaid zijn ten opzichte van de technicus. Gebruik de meerkanaalspipet om oplossingen in de PCR-strips te resuspenderen.
Vul met omgekeerd pipetteren de eerste drie kolommen van elke plaat met PCR-strip A, afwisselend even of oneven kolommen, zoals de plaatsing van de mastermix. Gebruik een pipet van 200 microliter die is ingesteld op 90 microliter, resuspendeer grondig de zevende standaard verdunningsbuis in PCR-strip S en vul de vierde tot en met zesde kolom op de platen. Tik na het vullen van de borden voorzichtig op het tafelblad om ervoor te zorgen dat de vloeistof in de putjes op de bodem bezinkt.
Bedek vervolgens de bovenkant van de platen met afdichtingsfolies en druk met de vingertoppen op alle randen van de folie om een goede afdichting te garanderen. Om de inhoud van de borden te mengen, draait u ze 30 seconden op de bovenkant van de kap. Plaats vervolgens de verzegelde platen gedurende twee minuten in de platenspinner met de putopeningen naar het midden gericht.
Plaats nu de platen in de thermocycler en zorg ervoor dat de kolomnummers leesbaar zijn. Reinig de bovenkant van elke plaat met een schone tissue voordat u de bovenkant van de thermocycler sluit. Klik vervolgens op de knop Start Run in de thermocycler-software voor beide machines.
Voer desgevraagd een titel in voor de analysebestanden, die worden gebruikt om de gegevens van dit experiment te labelen en bij te houden.
