Börja med att placera två 96-brunnars plattor, ett laddningstråg och flerkanaliga pipettspetsar inuti PCR-huven. Efter att ha märkt varje platta, vrid platta 1 180 grader så att kolumnnumren är upp och ner medan du lämnar platta 2 vänd mot teknikern. Häll sedan den fem milliliter stora tuben av den förberedda MM qPCR-masterblandningen i laddningstråget.
Använd en pipettspets för att säkerställa att all lösning från röret överförs. Fäst spetsarna på flerkanalspipetten och tryck på basen av varje spets för att säkerställa en tät tätning. Använd omvänd pipettering och fördela masterblandningen i antingen alla jämna eller alla udda kolumner först, alternerande mellan de två plattorna.
Efter vortexing och centrifugering av PCR-remsorna, ordna dem i rörstället i den ordning de kommer att placeras på plattorna. Vrid nu båda plattorna 180 grader så att kolumnnumren är omvända i förhållande till teknikern. Använd flerkanalspipetten för att återsuspendera lösningar i PCR-remsorna.
Använd omvänd pipettering, fyll de tre första kolumnerna på varje platta med PCR-remsa A, växla mellan jämna eller udda kolumner som mastermixplaceringen. Använd en 200 mikroliters pipett inställd på 90 mikroliter, återsuspendera noggrant det sjunde standardutspädningsröret i PCR-remsa S och fyll den fjärde till sjätte kolonnen på plattorna. Efter att ha fyllt plattorna, knacka dem försiktigt på bänkskivan för att säkerställa att vätskan i brunnarna sätter sig i botten.
Täck sedan topparna på plattorna med tätningsfilmer, tryck ner alla kanter på filmen med fingertopparna för att säkerställa en tät tätning. För att blanda innehållet i plattorna, snurra dem på huvens topp i 30 sekunder. Placera sedan de förseglade plattorna i plattspinnaren i två minuter med brunnsöppningarna vända mot mitten.
Placera nu plattorna i termocyklern och se till att kolumnnumren är läsbara. Rengör ovansidan av varje platta med en ren servett innan du stänger termocyklernas topp. Klicka sedan på knappen Starta körning på termocyklernas programvara för båda maskinerna.
När du uppmanas till det anger du en rubrik för analysfilerna, som ska användas för att märka och spåra data från det här experimentet.
