Başlamak için, PCR başlığının içine iki adet 96 oyuklu plaka, bir yükleme teknesi ve çok kanallı pipet uçları yerleştirin. Her bir plakayı etiketledikten sonra, plaka 1'yi 180 derece çevirin, böylece sütun numaraları baş aşağı olacak ve plaka 2'yi teknisyene bakacak şekilde bırakın. Daha sonra hazırlanan MM qPCR ana karışımının beş mililitrelik tüpünü yükleme oluğuna dökün.
Tüpteki tüm çözeltinin aktarıldığından emin olmak için bir pipet ucu kullanın. Sıkı bir sızdırmazlık sağlamak için her bir ucun tabanına bastırarak uçları çok kanallı pipete takın. Ters pipetlemeyi kullanarak, ana karışımı iki plaka arasında dönüşümlü olarak önce tüm çift veya tüm tek sütunlara dağıtın.
PCR şeritlerini girdapladıktan ve santrifüjledikten sonra, bunları plakalara yerleştirilecekleri sırayla tüp rafına yerleştirin. Şimdi her iki plakayı da 180 derece çevirin, böylece sütun numaraları teknisyene göre tersine çevrilir. PCR şeritlerindeki çözeltileri yeniden süspanse etmek için çok kanallı pipeti kullanın.
Ters pipetleme kullanarak, her bir plakanın ilk üç sütununu, ana karışım yerleşimi gibi çift veya tek sütunlar arasında geçiş yaparak PCR şeridi A ile doldurun. 90 mikrolitreye ayarlanmış 200 mikrolitrelik bir pipet kullanarak, yedinci standart seyreltme tüpünü PCR şeridi S'de iyice yeniden süspanse edin ve plakalardaki dördüncü ila altıncı sütunları doldurun. Plakaları doldurduktan sonra, kuyucuklardaki sıvının dibe çöktüğünü sağlamak için tezgah üstüne hafifçe vurun.
Ardından, sıkı bir sızdırmazlık sağlamak için filmin tüm kenarlarına parmak uçlarınızla bastırarak plakaların üst kısımlarını sızdırmazlık filmleriyle kaplayın. Plakaların içindekileri karıştırmak için, bunları 30 saniye boyunca davlumbazın üstünde döndürün. Daha sonra kapalı plakaları, kuyu açıklıkları merkeze bakacak şekilde iki dakika boyunca plaka döndürücüye yerleştirin.
Şimdi plakaları, sütun numaralarının okunaklı olduğundan emin olarak termocycler'a yerleştirin. Termosikleyici üstünü kapatmadan önce her plakanın üstünü temiz bir bezle temizleyin. Ardından Çalıştırmayı Başlat Her iki makine için de termocycler yazılımındaki düğmesine basın.
İstendiğinde, bu denemedeki verileri etiketlemek ve izlemek için kullanılacak analiz dosyaları için bir başlık girin.
