تحضير الوسائط المكيفة للخلايا السحائية البشرية (HMC) وجمع السائل النخاعي لثقافة الخلايا السرطانية المنتشرة

للبدء ، قم بطلاء قارورة T175 ب Poly-L-Lysine. ضع القارورة في حاضنة عند 37 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة. الآن استخدم ماصة مصلية معقمة لاستنشاق محلول اللايسين.

ماصة 30 ملليلتر وسط استزراع سحائي كامل يحتوي على خلايا سحائية بشرية في القارورة. احتضان الخلايا عند 37 درجة مئوية تحت مكملات ثاني أكسيد الكربون بنسبة 5٪. عندما تصل الخلايا إلى ما يقرب من 75٪ إلى 80٪ من الالتقاء ، قم بجمع وحفظ الوسائط المستزرعة HMC في أنبوب مخروطي 50 ملليلتر.

ثم أضف وسط استزراع سحائي كامل إلى الأنبوب بنسبة واحد إلى واحد. أخيرا ، ماصة عوامل النمو في الأنبوب لإنشاء وسائط HMC المكيفة. لمعالجة السائل الشوكي الدماغي ، ضعه أولا في أنبوب مخروطي سعة 15 ملليلتر على الجليد لتبريده.

أجهزة الطرد المركزي السائل في جهاز طرد مركزي مبرد مسبقا عند 257 جم لمدة خمس دقائق عند أربع درجات مئوية. ماصة من طاف دون إزعاج بيليه الخلية وجعل حصص منه في أنابيب مختلفة. أضف الآن ملليلتر واحد من PBS إلى بيليه الخلية لتعليقه.

أجهزة الطرد المركزي الخلايا في 1،500 غرام لمدة خمس دقائق عند أربع درجات مئوية. نضح طاف PBS مع ترك حوالي 50 ميكرولتر منه في قاع الأنبوب. قم بإجراء عدد الخلايا مع تعليق الخلية قبل زراعة الخلايا.

تم تنظيم العديد من عوامل النمو في وسائل الإعلام المزروعة بالخلايا السحائية البشرية.