CSF-insamling från möss med leptomeningeal sjukdom för efterföljande klonexpansion

Till att börja med ska du identifiera NSG-möss med immunbrist hos honkön som har leptomeningeal sjukdom eller LMD. Placera en sövd mus på operationsbordet. Placera musens nos i en modifierad L-formad kon i en stereotaktisk apparat, se till att näsborrarna förblir fria.

Dra huden försiktigt framåt över de ventrala ytorna på båda pinnarna och fäst den sedan på näskonen med tejp. För de kirurgiska saxspetsarna nedåt från pinnarna över nackbenet. Skapa ett litet snitt i mittlinjen som mäter fem till sju millimeter precis ovanför den palperade konkaviteten.

Med en trubbig pincett med en till två millimeters spets trycker du försiktigt på cisterna magna. För in spetsarna i stängt läge och öppna dem samtidigt som du utövar ett tryck nedåt på dura. Fortsätt att utföra trubbig dissektion tills duralmembranet är tydligt urskiljbart och de tillhörande blodkärlen är synliga inom det exponerade området.

Håll nu pincetten öppen för att dra tillbaka den omgivande muskulaturen. Fäst sedan en 27 till 29 gauge nål på en en milliliters spruta. Stick in sprutan under duran för att visualisera avfasningen.

Dra gradvis tillbaka sprutkolven för att samla upp så mycket cerebrospinalvätska som möjligt. Överför vätskan till ett mikrocentrifugrör. Lägg den omedelbart på is.

Centrifugera provet vid 257 g i fem minuter vid fyra grader Celsius. Efter att ha aspirerat supernatanten, pipettera 500 mikroliter steril PBS till cellpelleten. Centrifugera pelleten vid 257 g i fem minuter i rumstemperatur.

Kassera supernatanten och överför sedan pelleten till en 96-hålsplatta som innehåller HMC-konditionerade medier.