Isolierung der Arteria carotis communis und intrakarotis-Injektion für die intraarterielle Verabreichung bei Mäusen

Ordnen Sie zunächst alle für die Mauschirurgie erforderlichen Materialien auf dem Operationstisch an. Lege die betäubte Maus auf den Tisch und stelle sicher, dass sich das Kissen unter ihrem Nacken befindet. Desinfizieren Sie die Operationsstelle, indem Sie dreimal pro Desinfektionsmittel abwechselnd kreisförmige Tupfer von Betadin oder Chlorhexidin und Alkohol geben.

Führen Sie eine Zehenkneifung durch, um die Tiefe der Anästhesie zu bestätigen. Fesseln Sie die vorderen Gliedmaßen der Maus mit chirurgischem Klebeband. Bringen Sie unter einem Präpariermikroskop die ventrale Oberfläche des Maushalses ins Blickfeld und stellen Sie die Vergrößerung so ein, dass Sie das Operationsfeld bequem beobachten können.

Nachdem Sie einen Zentimeter langen Mittellinienschnitt gemacht haben, führen Sie die Spitze der geschlossenen Schere in den Schnitt ein und öffnen Sie sie vorsichtig, um eine stumpfe Dissektion des subkutanen Bindegewebes durchzuführen und die beiden Speicheldrüsen zu trennen. Ziehen Sie mit Hilfe einer feinen Pinzette die rechte Speicheldrüse vorsichtig durch den Schnitt, damit sie auf der Außenfläche aufliegt, oder verwenden Sie einen stumpfen Hakenretraktor, um die Speicheldrüse seitlich zurückzuziehen. Fahren Sie mit der stumpfen Dissektion des Bindegewebes fort, bis der Sternocleidomastoideus und die Digastricusmuskulatur sichtbar sind.

Setzen Sie mit einer abgewinkelten Pinzette die vorsichtige Dissektion des Bindegewebes in der Nähe des kaudalen Endes des Muskeldreiecks fort, um die Halsvene, den Vagusnerv und die Arteria carotis communis (CCA) freizulegen. Fahren Sie fort, das Bindegewebe um den CCA herum von der Basis des Muskeldreiecks bis zum Musculus omohyoidus zu präparieren. Verwenden Sie kleine Wattebällchen, um kleinere Blutungen zu kontrollieren und abgesonderte Flüssigkeiten aus den Speicheldrüsen aufzunehmen.

Präparieren Sie das Bindegewebe, um den CCA vom Vagusnerv zu trennen, und achten Sie besonders darauf, die Handhabung und Schädigung des Vagusnervs zu minimieren. Legen Sie nach der Mobilisierung der CCA ein ein Zentimeter langes Stück 6-0-Naht auf das Brustbein und führen Sie die abgewinkelte Pinzette unter die CCA. Führen Sie mit der Winkelzange in der rechten Hand und der feinen Pinzette in der linken Hand die Naht an die Winkelzange und greifen Sie nahe dem Ende der Naht.

Ziehen Sie vorsichtig die Hälfte der Länge der Naht unter den CCA. Nachdem Sie eine zweite Naht gelegt haben, binden Sie jede Naht locker um den CCA, ohne die Knoten zu straffen oder den Blutfluss einzuschränken. Entfernen Sie mit der abgewinkelten Pinzette vorsichtig das Bindegewebe am oberen Ende des Muskeldreiecks über dem Musculus omohyoidus, um das CCA und seine Bifurkation in die Arteria carotis externa und die Arteria carotis interna zu lokalisieren.

Legen Sie dann ein Stück Naht auf das Brustbein und entfernen Sie vorsichtig das Bindegewebe von allen Seiten der Arteria carotis externa in der Nähe der Bifurkation. Führen Sie die Zange mit abgewinkelter Spitze unter der äußeren Halsschlagader hindurch. Führen Sie mit der feinen Pinzette in der linken Hand die Naht an die abgewinkelte Pinzette im Raum zwischen der inneren und der äußeren Halsschlagader und ziehen Sie vorsichtig an der Hälfte der Nahtlänge.

Binden Sie die Naht locker um die äußere Halsschlagader, ohne den Knoten festzuziehen. Um die gebogene Nadel vorzubereiten, halten Sie eine 33-Gauge-Nadel mit einem halben Zoll mit der Fase nach oben. Fassen Sie die Spitze der Nadel mit einem sterilen Nadeltreiber und biegen Sie sie etwa 30 bis 40 Grad in Richtung Abschrägung.

Ziehen Sie den Knoten der Naht um die Arteria carotis externa fest. Schieben Sie dann die untere Naht auf dem CCA so weit wie möglich in Richtung des Musculus sternocleidomastoideus und ziehen Sie den Knoten fest. Legen Sie einen Wattebausch an den Rand des Hohlraums, um während der Injektion abgesonderte Flüssigkeit und Blut aufzunehmen.

Halten Sie die Spritze in der rechten Hand und die feine Pinzette in der linken Hand und führen Sie die Nadel zur Arterie unmittelbar über der unteren Naht des CCA. Ziehen Sie mit der feinen Pinzette vorsichtig am losen Ende der unteren Naht in kaudaler Richtung, um eine geringe Spannung auf den CCA auszuüben. Führen Sie die Nadel direkt hinter der Fase in den CCA ein und lösen Sie langsam die Spannung aus der Naht.

Drücken Sie mit der linken Hand auf den Spritzenkolben, um die Lösung, die das interessierende oder kontrollierende Mittel enthält, langsam zu injizieren. Fassen Sie dann mit der feinen Pinzette die lose gebundene obere Naht an der CCA und heben Sie sie an, um die Arterie zu knicken. Entfernen Sie die Nadel und legen Sie die Spritze beiseite.

Halten Sie mit der abgewinkelten Pinzette in der rechten Hand den Knick in der Arterie und ziehen Sie den Knoten in der oberen Naht am CCA fest. Nehmen Sie mit Wattebällchen das restliche Blut in der Operationshöhle auf. Lokalisieren Sie die Injektionsstelle auf dem CCA und bestimmen Sie die Anzahl der Nähte, die zum Schließen erforderlich sind.

Spülen Sie die Injektionsstelle und das Lumen des isolierten Bereichs des CCA gründlich mit steriler Kochsalzlösung, um geronnenes Blut zu entfernen. Fassen Sie die Nahtnadel 9-0 mit der abgewinkelten Pinzette nahe an das Abwasser. Halten Sie die Arterie fest und drücken Sie die CCA-Seiten vorsichtig mit der feinen Pinzette zusammen.

Führen Sie dann die Nadel und die Naht mit einem einzigen Biss durch beide Seiten der Arterie. Um die Inzisionsstelle mit einem chirurgischen Knoten zu schließen, führen Sie mit der feinen Pinzette und der abgewinkelten Pinzette mit mindestens vier Würfen eine Instrumentenbindung durch. Mit der feinen Pinzette die Naht um die Arteria carotis externa lösen und entfernen, gefolgt von einer oberen Naht an der CCA, um die Durchblutung wiederherzustellen.

Lösen Sie langsam die untere Naht am CCA, aber lösen Sie sie nicht sofort. Nachdem Sie sich vergewissert haben, dass die Injektionsstelle ausreichend verschlossen ist, entfernen Sie die obere und untere CCA-Naht. Positionieren Sie die Speicheldrüse wieder in der Kavität und verschließen Sie den Schnitt mit einer Naht, die alle drei bis vier Millimeter platziert wird.

Nach intrakarotiser Injektion von GFP-markierten mesenchymalen Stammzellen des Knochenmarks des menschlichen Knochenmarks zeigte die Immunhistochemie der Hirnschnitte das Vorhandensein von GFP-positiven Zellen, was auf die Homing von humanen mesenchymalen Stammzellen des Knochenmarks zu den Gliomen hinweist. Es wurde kein signifikanter Unterschied in der Effizienz der GFP-Homing-Versorgung von mesenchymalen Stammzellen zwischen den CCA-Ligations- und CCA-Reparaturverfahren beobachtet. Die Dispersion von GFP-humanen mesenchymalen Stammzellen innerhalb des Tumors zeigte keinen signifikanten Unterschied zwischen der medianen Anzahl von GFP-positiven Zellen in Hochleistungsfeldern zwischen der CCA-Ligation und der CCA-Reparaturgruppe.