まず、マウス手術に必要なすべての材料を手術台に並べます。麻酔をかけたマウスをテーブルの上に置き、枕が首の下にあることを確認します。消毒剤ごとにベタジンまたはクロルヘキシジンとアルコールの円形スワブを交互に3回行って、手術部位を消毒します。
つま先をつまんで麻酔の深さを確認します。サージカルテープを使用して、マウスの前肢を拘束します。解剖顕微鏡でマウスの首の腹面を視野に入れ、倍率を調整して手術部位を快適に観察します。
縦方向の正中線を1cm切開した後、閉じたハサミの先端を切開部に挿入し、そっと開いて皮下結合組織の鈍的解剖を行い、2つの唾液腺を分離します。細い鉗子の助けを借りて、切開部から右の唾液腺をそっと引っ張って外面に置くか、鈍いフックリトラクターを使用して唾液腺を横方向に引っ込めます。胸鎖乳突筋と二腹筋が見えるまで、結合組織の鈍的解剖を続けます。
先端が角度のついた鉗子を使用して、筋三角形の尾側端付近の結合組織の慎重な解剖を続け、頸静脈、迷走神経、および総頸動脈(CCA)を露出させます。筋の三角形の基部から舌骨筋まで、CCAの周りの結合組織を解剖し続けます。小さなコットンボールを使用して、軽度の出血を抑え、唾液腺から分泌された液体を吸収します。
結合組織を解剖して CCA を迷走神経から分離し、迷走神経の取り扱いと損傷を最小限に抑えるために特別な注意を払います。CCAを動員した後、胸骨に1センチメートルの6-0縫合糸を留置し、先端の角度のある鉗子をCCAの下に通します。右手に先端の角度のある鉗子、左手に細い鉗子を持って、先端の角度のある鉗子に縫合糸を通し、縫合糸の端近くをつかみます。
縫合糸の長さの半分をCCAの下にそっと引っ張ります。2本目の縫合糸を装着した後、結び目を締めたり血流を制限したりすることなく、各縫合糸をCCAの周りに緩く結びます。先端の角度のある鉗子を使用して、舌骨筋の上の筋肉の三角形の上端にある結合組織を慎重に取り除き、CCAとその分岐部を外部頸動脈と内部頸動脈に位置付けます。
次に、胸骨に縫合糸を留置し、分岐部の近くの外部頸動脈のすべての側面から結合組織を慎重に取り除きます。先端の角度のついた鉗子を外頸動脈の下に通します。細い鉗子を左手に持った状態で、内頸動脈と外頸動脈の間の角のある先端の鉗子に縫合糸を通し、縫合糸の長さの半分をそっと引っ張ります。
結び目を締めずに、縫合糸を外頸動脈の周りにゆるく結びます。曲がった針を準備するには、33ゲージのハーフインチ針をベベルを上に向けて持ちます。滅菌ニードルドライバーで針の先端をつかみ、ベベルに向かって約30〜40度曲げます。
外頸動脈の周りの縫合糸の結び目を締めます。次に、CCAの下部縫合糸を胸鎖乳突筋に向かってできるだけスライドさせ、結び目を締めます。注入中に分泌された液体と血液を吸収するために、空洞の端にコットンボールを置きます。
右手に注射器、左手に細い鉗子を持ち、CCAの下部縫合糸のすぐ上の動脈に針を運びます。細い鉗子で、下部縫合糸の緩い端を尾方向にそっと引っ張り、CCAに低レベルの張力をかけます。針を斜角のすぐ後ろのCCAに挿入し、縫合糸からゆっくりと張力を解放します。
左手でシリンジプランジャーを押して、対象または制御する薬剤を含む溶液をゆっくりと注入します。次に、CCAで緩く結ばれた上部縫合糸を細い鉗子でつかみ、持ち上げて動脈をねじります。針を取り外し、シリンジを脇に置きます。
先端の角度のついた鉗子を右手に持った状態で、動脈のねじれを保ち、CCAの上部縫合糸の結び目を締めます。コットンボールを使用して、手術腔内に残っている血液を吸収します。CCA上の注射部位を特定し、閉じるために必要な縫合糸の数を決定します。
CCAの隔離された領域の注射部位と内腔を滅菌生理食塩水で完全に洗浄し、凝固した血液を取り除きます。.先端の角度のついた鉗子を使用して、9-0縫合針を下水の近くでつかみます。動脈を保持し、細かい鉗子でCCAの側面をそっと押します。
次に、針を通し、動脈の両側に一口で縫合します。外科医の結び目で切開部位を閉じるには、細い鉗子と角度のある先端の鉗子で、最低4回のスローを使用して器具のタイを行います。細い鉗子を使用して、外頸動脈の周りの縫合糸をほどいて取り除き、続いてCCAの上部縫合糸をCCAに戻し、循環を回復させます。
CCAの下部縫合糸をゆっくりと緩めますが、すぐにほどかないでください。注入部位が十分に閉じていることを確認後、上下のCCA縫合糸を抜去します。唾液腺を空洞に再配置し、滅菌縫合パックを使用して、3〜4ミリメートルごとに1つの縫合糸を配置して切開を閉じます。
GFP標識骨髄ヒト間葉系幹細胞の頸動脈内注射後、脳切片の免疫組織化学によりGFP陽性細胞の存在が明らかになり、骨髄ヒト間葉系幹細胞が神経膠腫にホーミングしたことが示されました。GFPヒト間葉系幹細胞のホーミング効率には、CCAライゲーションとCCA修復手順の間で有意差は観察されませんでした。腫瘍内でのGFPヒト間葉系幹細胞の分散では、CCAライゲーション群とCCA修復群との間の高能電場におけるGFP陽性細胞の数の中央値との間に有意差は認められませんでした。
