Para começar, organize todos os materiais necessários para a cirurgia do rato na mesa cirúrgica. Coloque o mouse anestesiado sobre a mesa, garantindo que o travesseiro esteja embaixo do pescoço. Desinfete o local da cirurgia alternando swabs circulares de betadina ou clorexidina e álcool três vezes por desinfetante.
Faça uma pinça do dedo do pé para confirmar a profundidade da anestesia. Usando fita cirúrgica, prenda os membros anteriores do mouse. Sob um microscópio de dissecação, aproxime a superfície ventral do pescoço do camundongo e ajuste a ampliação para observar o local da cirurgia confortavelmente.
Depois de fazer uma incisão longitudinal de um centímetro na linha média, insira a ponta da tesoura fechada na incisão e abra-a suavemente para realizar uma dissecção romba do tecido conjuntivo subcutâneo, separando as duas glândulas salivares. Com a ajuda de uma pinça fina, puxe suavemente a glândula salivar direita através da incisão para descansar na superfície externa ou use um afastador de gancho rombudo para retrair a glândula salivar lateralmente. Continue com a dissecção romba do tecido conjuntivo até que o esternocleidomastóideo e os músculos digástricos estejam visíveis.
Usando uma pinça de ponta angular, continue a dissecção cuidadosa do tecido conjuntivo próximo à extremidade caudal do triângulo muscular para expor a veia jugular, o nervo vago e a artéria carótida comum, ou CCA. Continue dissecando o tecido conjuntivo ao redor do CCA da base do triângulo muscular até o músculo omo-hióideo. Use pequenas bolas de algodão para controlar qualquer sangramento menor e absorver os fluidos secretados das glândulas salivares.
Disseque o tecido conjuntivo para separar o CCA do nervo vago, tomando cuidado especial para minimizar o manuseio e os danos ao nervo vago. Depois de mobilizar o CCA, coloque um pedaço de sutura 6-0 de um centímetro no esterno e passe a pinça de ponta angular sob o CCA. Com a pinça de ponta angular na mão direita e a pinça fina na mão esquerda, passe a sutura para a pinça de ponta angular e segure perto do final da sutura.
Puxe suavemente metade do comprimento da sutura sob o CCA. Depois de colocar uma segunda sutura, amarre frouxamente cada sutura ao redor do CCA sem apertar os nós ou restringir o fluxo sanguíneo. Usando a pinça de ponta angular, remova cuidadosamente o tecido conjuntivo na extremidade superior do triângulo muscular acima do músculo omo-hióideo para localizar o CCA e sua bifurcação na artéria carótida externa e na artéria carótida interna.
Em seguida, coloque um pedaço de sutura no esterno e limpe cuidadosamente o tecido conjuntivo de todos os lados da artéria carótida externa perto da bifurcação. Passe a pinça de ponta angulada sob a artéria carótida externa. Com a pinça fina na mão esquerda, passe a sutura para a pinça de ponta angular no espaço entre a artéria carótida interna e externa e puxe suavemente metade do comprimento da sutura.
Amarre frouxamente a sutura ao redor da artéria carótida externa sem apertar o nó. Para preparar a agulha dobrada, segure uma agulha de calibre 33 de meia polegada com o chanfro voltado para cima. Segure a ponta da agulha com uma chave de agulha estéril e dobre-a aproximadamente 30 a 40 graus em direção ao chanfro.
Aperte o nó da sutura ao redor da artéria carótida externa. Em seguida, deslize a sutura inferior do CCA em direção ao músculo esternocleidomastóideo o máximo possível e aperte o nó. Coloque uma bola de algodão na borda da cavidade para absorver o fluido secretado e o sangue durante a injeção.
Segurando a seringa na mão direita e a pinça fina na mão esquerda, leve a agulha até a artéria imediatamente acima da sutura inferior no CCA. Com a pinça fina, puxe suavemente a extremidade solta da sutura inferior na direção caudal para colocar um baixo nível de tensão no CCA. Insira a agulha no CCA logo após o chanfro e libere lentamente a tensão da sutura.
Com a mão esquerda, empurre o êmbolo da seringa para injetar lentamente a solução que contém o agente de interesse ou controle. Em seguida, segure a sutura superior frouxamente amarrada no CCA com a pinça fina e levante para dobrar a artéria. Retire a agulha e reserve a seringa.
Com a pinça de ponta angular na mão direita, mantenha a dobra na artéria e aperte o nó na sutura superior do CCA. Usando bolas de algodão, absorva qualquer sangue residual dentro da cavidade cirúrgica. Localize o local da injeção no CCA e determine o número de suturas necessárias para fechar.
Irrigue bem o local da injeção e o lúmen da área isolada do CCA com solução salina estéril para remover o sangue coagulado. Usando a pinça de ponta angular, segure a agulha de sutura 9-0 perto do esgoto. Segure a artéria e pressione suavemente os lados do CCA juntos com a pinça fina.
Em seguida, passe a agulha e suture por ambos os lados da artéria com uma única mordida. Para fechar o local da incisão com um nó de cirurgião, execute uma amarração do instrumento com a pinça fina e a pinça de ponta angular usando um mínimo de quatro arremessos. Usando a pinça fina, desamarre e remova a sutura ao redor da artéria carótida externa, seguida de uma sutura superior na ACC para restaurar a circulação.
Afrouxe lentamente a sutura inferior do CCA, mas não a desamarre imediatamente. Depois de confirmar que o local da injeção está suficientemente fechado, remova as suturas superior e inferior do CCA. Reposicione a glândula salivar na cavidade e, usando uma bolsa de sutura estéril, feche a incisão com uma sutura colocada a cada três a quatro milímetros.
Após a injeção intracarotídea de células-tronco mesenquimais humanas da medula óssea marcadas com GFP, a imuno-histoquímica de seções cerebrais revelou a presença de células positivas para GFP, indicando o retorno de células-tronco mesenquimais humanas da medula óssea aos gliomas. Não foi observada diferença significativa na eficiência de homing de células-tronco mesenquimais humanas GFP entre os procedimentos de ligadura CCA e reparo de CCA. A dispersão de células-tronco mesenquimais humanas GFP dentro do tumor não revelou diferença significativa entre as contagens medianas de células GFP positivas em campos de alta potência entre os grupos de ligação CCA e reparo CCA.
