Begynd med at placere det bedøvede dyr på operationsplatformen. Påfør smørende øjensalve på hvert dyrs øjne for at forhindre udtørring af hornhinden under operationen. Desinficer det barberede operationssted med tre skiftevis runder povidonjod og isopropanol.
Placer derefter en rulle papirhåndklæde eller et rør med en diameter på 1,5 centimeter under dyret lige rostralt til hofterne. Draper dyret med et fenestreret draperet, centrer fenestrationen over lændehvirvelsøjlen for kirurgisk adgang. For at verificere dybden af anæstesi hos dyret skal du klemme hver pote og observere for fraværet af tilbagetrækningsrespons.
Brug derefter et skalpelblad nummer 11 til at lave et tre centimeter langt hudsnit ned ad midterlinjen fra L2 til L6 ryghvirvler. Indsæt nu en steril buet kirurgisk saks mellem musklen og huden, og åbn forsigtigt spidserne for at adskille huden fra den underliggende muskel. Fjern fascien, der dækker de spinøse processer af L2 til L5 ryghvirvler.
Der pipetteres 25 til 35 mikroliter af AAV9-vektoren i hætten på et sterilt mikrocentrifugerør. Træk hele vektorens volumen fra hætten ind i insulinsprøjten. Identificer derefter L5- og L4-spinøse processer på dyret.
Placer sprøjtenålen til venstre for L5-spinøs proces, og juster den med den haleformede ende af processen. Før sprøjtenålen frem ca. otte millimeter over L5-laminaen og derefter under L4-laminaen ind i lændecisternen, indtil der er kontakt med knoglen. Tryk sprøjtestemplet langsomt ned i ca. fem sekunder.
Træk derefter langsomt nålen ud af indføringsstedet. Brug en 4-0 sutur eller kirurgiske hæfteklammer til at begynde at lukke snittet i den ene ende af såret. For at evaluere succesen med farvestofinjektion, efter aflivning af dyret, skal du lave et fire centimeter langt snit i musklen parallelt med rygsøjlen på begge sider af de spinøse processer.
Brug rygpincet eller saks til forsigtigt at fjerne musklen mellem de spinøse processer. ved hjælp af en rongeur udvindes de spinøse processer fra L6 til den nedre thorax rygsøjle. Indsæt den nederste spids af rongeur under L5-laminaen og fjern metodisk knoglen over rygmarven ved at tage flere bid ud af den.