Begin met het plaatsen van het verdoofde dier op het chirurgische platform. Breng smerende oogzalf aan op de ogen van elk dier om uitdroging van het hoornvlies tijdens de operatie te voorkomen. Desinfecteer de geschoren operatieplaats met drie afwisselende rondes povidonjodium en isopropanol.
Plaats vervolgens een rol keukenpapier of een buis met een diameter van 1,5 centimeter onder het dier, net rostraal tot aan de heupen. Drapeer het dier met een gatlaken en centreer het venster over de lumbale wervelkolom voor chirurgische toegang. Om de diepte van de anesthesie bij het dier te verifiëren, knijpt u in elke poot en observeert u of er geen terugtrekkingsreactie is.
Maak vervolgens met een scalpelmesje nummer 11 een drie centimeter lange huidincisie langs de middellijn van L2 tot L6 wervels. Steek nu een steriele gebogen chirurgische schaar tussen de spier en de huid en open voorzichtig de punten om de huid van de onderliggende spier te scheiden. Verwijder de fascia die de processus spinosus van de wervels L2 tot L5 bedekt.
Pipetteer 25 tot 35 microliter van de AAV9-vector in de dop van een steriele microcentrifugebuis. Zuig het volledige volume van de vector van de dop in de insulinespuit. Identificeer vervolgens de processus spinosus L5 en L4 op het dier.
Plaats de naald van de spuit links van de processus spinosus L5 en lijn deze uit met het caudale uiteinde van het processieproces. Schuif de naald van de spuit ongeveer acht millimeter naar voren over de L5-lamina en vervolgens onder de L4-lamina door in de lumbale stortbak totdat contact wordt gemaakt met het bot. Druk de zuiger van de spuit langzaam in gedurende ongeveer vijf seconden.
Trek vervolgens de naald langzaam terug van de inbrengplaats. Gebruik een 4-0 hechting of chirurgische nietjes om de incisie aan het ene uiteinde van de wond te sluiten. Om het succes van kleurstofinjectie te evalueren, maakt u na euthanasie van het dier een vier centimeter lange incisie in de spier evenwijdig aan de wervelkolom aan beide zijden van de doornuitsteeksels.
Gebruik een pincet of schaar om de spier tussen de processus spinosus voorzichtig te verwijderen. extraheer met behulp van een rongeur de processus spinosus van de L6 naar de onderste thoracale wervelkolom. Steek de onderste punt van de rongeur onder de L5-lamina en verwijder methodisch het bot dat over het ruggenmerg ligt door er meerdere happen uit te nemen.