Begynn med å plassere det bedøvede dyret på den kirurgiske plattformen. Påfør smørende øyesalve på hvert dyrs øyne for å forhindre uttørking av hornhinnen under operasjonen. Desinfiser det barberte operasjonsstedet med tre vekslende runder med povidonjod og isopropanol.
Plasser deretter en rull papirhåndkle eller et rør med en diameter på 1,5 centimeter under dyret bare rostralt til hoftene. Draper dyret med en fenestrert drapering, sentrer fenestrasjonen over korsryggen for kirurgisk tilgang. For å verifisere dybden av anestesi hos dyret, klyp hver pote og observer for fravær av tilbaketrekningsrespons.
Bruk deretter et skalpellblad nummer 11 til å lage et tre centimeter langt hudsnitt nedover midtlinjen fra L2 til L6 ryggvirvler. Sett nå inn en steril buet kirurgisk saks mellom muskelen og huden, og åpne spissene forsiktig for å skille huden fra den underliggende muskelen. Fjern fascien som dekker de spinøse prosessene til L2 til L5 ryggvirvler.
Pipetter 25 til 35 mikroliter av AAV9-vektoren inn i hetten på et sterilt mikrosentrifugerør. Trekk hele volumet av vektoren fra hetten inn i insulinsprøyten. Identifiser deretter L5 og L4 spinøse prosesser på dyret.
Plasser sprøytekanylen til venstre for L5 spinøs prosess, og juster den med den kaudale enden av prosessen. Før sprøytenålen fremover omtrent åtte millimeter over L5-laminaen, og deretter under L4-laminaen inn i lumbalsisternen til det kommer kontakt med bein. Trykk sprøytestempelet sakte ned i ca. fem sekunder.
Trekk deretter nålen sakte ut av innføringsstedet. Bruk en 4-0 sutur eller kirurgiske stifter, begynn å lukke snittet i den ene enden av såret. For å evaluere suksessen med fargestoffinjeksjon, etter å ha avlivet dyret, gjør du et fire centimeter langt snitt i muskelen parallelt med ryggraden på begge sider av de spinøse prosessene.
Bruk ryggradstang eller saks for å forsiktig fjerne muskelen mellom de spinøse prosessene. ved hjelp av en rongeur, trekk ut de spinøse prosessene fra L6 til den nedre thorax ryggraden. Sett den nedre spissen av rongeur under L5-laminaen og fjern metodisk beinet som ligger over ryggmargen ved å ta flere biter ut av den.