시작하려면 안락사된 쥐를 복부 쪽이 위를 향하도록 코르크 판에 놓습니다. 핀셋을 사용하여 복부 중앙의 면도 피부를 들어 올리고 멸균 가위로 절개합니다. 피부를 잘라 복막에서 분리합니다.
그런 다음 복막층을 들어 올려 자릅니다. 새로운 멸균 핀셋과 가위 세트를 사용하여 고환 위에 위치한 전체 부고환 지방 조직을 부드럽게 잡고 들어 올리고 자릅니다. 절제된 지방을 얼음 위에 기초 배지가 들어 있는 50밀리리터의 멸균 원추형 튜브에 넣습니다.
다음으로, PBS로 부고환 조직을 세척합니다. 멸균 핀셋을 사용하여 부고환 지방 조직을 15-20 밀리리터의 소화액이 들어있는 튜브로 옮깁니다. 멸균 가위로 조직을 조각으로 자릅니다.
그런 다음 조직 조각을 섭씨 37도에서 한 시간 동안 배양합니다. 동일한 부피의 기초 배지에 샘플을 희석하여 콜라겐분해효소를 비활성화합니다. 현탁액을 섭씨 4도에서 10분 동안 250G로 원심분리합니다.
상층액을 버린 후 펠릿을 기저 배지 1밀리리터에 다시 현탁시킵니다. 다음으로, 분리된 세포가 있는 3밀리리터의 기저 배지가 들어 있는 6웰 플레이트의 웰을 확인합니다. 섭씨 37도에서 5%의 이산화탄소로 밤새 세포를 배양합니다.
다음 날, PBS 세척된 세포에 3ml의 기저 배지를 추가합니다. 지방 조직에서 추출한 세포는 중간엽 줄기세포 형태가 일치하는 것으로 나타났습니다.
