治療研究のためのマウス脂肪組織由来幹細胞の分化

骨形成分化によるマウス脂肪組織由来幹細胞の機能的特性評価を行うには、まずトリプシンEDTAを用いて細胞を剥離します。トリプシン処理された細胞を円錐形のチューブに集めます。次に、細胞を基礎培地を入れた6枚の壁プレートのウェルに細胞を固定します。

プレートを摂氏37度でインキュベートし、5%の二酸化炭素を補給します。24時間後、培地を骨形成培地と交換します。次に、細胞をVon Kossa染色で染色し、石灰化結節を評価します。

培地を吸引した後、細胞をPBSで2回洗浄します。細胞を2ミリリットルの70%エタノールに室温で一晩固定します。次に、2ミリリットルの5%硝酸銀溶液をウェルに加えます。

細胞を蒸留水で洗浄した後、細胞を2ミリリットルの5%チオ硫酸ナトリウムで5分間インキュベートします。洗浄した細胞を2ミリリットルのエオシンで40秒間対比染色します。汚れを洗い流した後、プレートを光学顕微鏡にかけ、染色細胞を観察します。

脂肪組織由来幹細胞は、骨芽細胞、脂肪芽細胞、軟骨芽細胞に分化するための多効力を示しました。フォン・コッサ染色は、骨芽細胞に特徴的な石灰化結節の存在を示した。脂肪形成細胞は幹細胞の細胞質に脂質液胞の存在を示し、アルシアンブルー染色は細胞外マトリックスにグリコサミノグリカンの存在を明らかにしました。