골형성 분화에 의한 마우스 지방 조직 유래 줄기 세포의 기능적 특성 분석을 수행하려면 먼저 트립신 EDTA를 사용하여 세포를 분리합니다. 트립신화된 세포를 원뿔형 튜브에 수집합니다. 다음으로, 기저 배지가 있는 6개의 벽 플레이트의 웰에 세포를 앉힙니다.
섭씨 37도에서 이산화탄소 5% 보충 하에 플레이트를 배양합니다. 24시간 후 배지를 골형성 배지로 교체합니다. 그런 다음 Von Kossa 염색으로 세포를 염색하여 광물화된 결절을 평가합니다.
배지를 흡인한 후 PBS로 세포를 두 번 세척합니다. 실온에서 하룻밤 동안 70% 에탄올 2밀리리터에 세포를 고정합니다. 다음으로, 5% 질산은 용액 2밀리리터를 우물에 넣습니다.
증류수로 세포를 세척한 후 5% 티오황산나트륨 2밀리리터에 5분 동안 세포를 배양합니다. 세척된 세포를 40초 동안 2mL의 에오신으로 대조염색합니다. 얼룩을 씻어낸 후 플레이트를 광학 현미경 아래에 놓고 염색 세포를 봅니다.
지방조직 유래줄기세포는 조골세포, 지방아세포, 연골아세포로 분화하는 다효능을 보였다. Von Kossa 염색은 조골세포 특유의 광물화된 결절의 존재를 보여주었습니다. 지방형성 세포는 줄기세포의 세포질에 지질 액포의 존재를 보여주었고 Alcian bluestaining은 세포외 기질에 글리코사미노글리칸의 존재를 보여주었습니다.