Para realizar a caracterização funcional de células-tronco derivadas do tecido adiposo de camundongo por diferenciação osteogênica, primeiro desprenda as células usando tripsina EDTA. Colete as células tripsinizadas em um tubo cônico. Em seguida, coloque as células nos poços de uma placa de seis paredes com meio basal.
Incube as placas a 37 graus Celsius sob 5% de suplementação de dióxido de carbono. Após 24 horas, substitua o meio por meio osteogênico. Em seguida, comine as células com a coloração de Von Kossa para avaliar os nódulos mineralizados.
Lave as células duas vezes com PBS após aspirar o meio. Fixe as células em dois mililitros de etanol a 70% durante a noite em temperatura ambiente. Em seguida, adicione dois mililitros de solução de nitrato de prata a 5% nos poços.
Depois de lavar as células com água destilada, incube as células em dois mililitros de tiossulfato de sódio a 5% por cinco minutos. Contra-core as células lavadas com dois mililitros de eosina por 40 segundos. Depois de lavar a mancha, coloque a placa sob um microscópio óptico para visualizar as células da mancha.
As células-tronco derivadas do tecido adiposo apresentaram multipotência para se diferenciar em osteoblastos, adipoblastos e condroblastos. A coloração de Von Kossa mostrou a presença de nódulos mineralizados característicos de osteoblastos. As células adipogênicas mostraram a presença de vacúolos lipídicos no citoplasma das células-tronco, enquanto a coloração azul de Alcian revelou a presença de glicosaminoglicanos na matriz extracelular.