Чтобы выполнить функциональную характеристику стволовых клеток, полученных из жировой ткани мыши, путем остеогенной дифференцировки сначала отделяют клетки с помощью трипсина ЭДТА. Соберите трипсинизированные клетки в коническую трубку. Далее рассаживают ячейки в лунки шестистенной пластины с базальной средой.
Инкубируйте планшеты при температуре 37 градусов Цельсия с добавлением 5% углекислого газа. Через 24 часа замените среду остеогенной средой. Затем окрашивайте клетки красителем фон Косса, чтобы оценить минерализованные узелки.
Промойте клетки два раза PBS после аспирации среды. Закрепите ячейки в двух миллилитрах 70%-ного этанола на ночь при комнатной температуре. Далее добавьте в лунки два миллилитра 5%-ного раствора нитрата серебра.
Промыв клетки дистиллированной водой, инкубируйте клетки в двух миллилитрах 5%-ного тиосульфата натрия в течение пяти минут. Запятнайте промытые клетки двумя миллилитрами эозина в течение 40 секунд. Смыв пятно, поместите пластину под оптический микроскоп, чтобы рассмотреть пятнающие клетки.
Стволовые клетки, полученные из жировой ткани, продемонстрировали мультипотенцию для дифференцировки в остеобласты, адипобласты и хондробласты. Окрашивание фон Косса показало наличие минерализованных конкреций, характерных для остеобластов. Адипогенные клетки показали присутствие липидных вакуолей в цитоплазме стволовых клеток, в то время как окрашивание Альцианской синей показало присутствие гликозаминогликана во внеклеточном матриксе.