Per iniziare, ottenere una coltura cellulare della muscolatura liscia delle vie aeree umane, o HASM. Utilizzando una pipetta sierologica, rimuovere ed eliminare il terreno HASM dal pallone di coltura. Per lavare le cellule, aggiungere cinque millilitri di magnesio e Delbecos PBS, o DPBS, senza calcio, preriscaldare a 37 gradi Celsius.
E inclinare delicatamente il pallone. Per staccare le cellule, aggiungere tre millilitri di viaggi allo 0,25% in EDTA e incubare le cellule per tre-cinque minuti. Dopo aver aggiunto cinque millilitri di terreno fresco contenente antibiotici, trasferire le cellule in una provetta da 15 millilitri e centrifugare a 200 G per cinque minuti.
Rimuovere il surnatante e aggiungere delicatamente 500 microlitri di DPBS senza magnesio e calcio lungo la parete del tubo. Dopo aver rimosso il liquido, contare le cellule al microscopio per regolare la densità cellulare a 40.000 cellule per millilitro. Preparare una miscela master contenente i reagenti vettori e il numero di cellule richiesto.
Erogare 500 microlitri di master mix in ogni pozzetto di un piatto da 35 millimetri e incubarlo. Il secondo giorno, aspirare con cura il terreno da ciascun pozzetto e aggiungere 450 microlitri di DPBS contenente magnesio e calcio preriscaldati a 37 gradi Celsius. Avvolgere la piastra di coltura in un foglio di alluminio e incubare a 37 gradi Celsius per 30 minuti a un'ora.
Verificare al microscopio la salute delle cellule ed eseguire diluizioni dei cereali per preparare 100 micromolari di forskolina e 100 nanomolari di isoproterenolo per il trattamento farmacologico.