Hermafroditten gamet demetlerini ve gonokorik mercan türlerinden spermleri topladıktan sonra, bunları etiketli 50 mililitrelik tüplere yerleştirin. Bir Makler sayma odasına dört mikrolitre aktif sperm süspansiyonu yerleştirin. Sperm hareketliliğini değerlendirmek için, aktive edilmiş numunenin konsantrasyonunu ekleyin.
Mercan biyobankacılığı otomatik veri sayfası dosyasını açın ve bilgisayar destekli sperm analizi değerlendirmesi için kullanılan sperm seyreltme faktörünü girin. Daha sonra sperm konsantrasyonu, total motilite ve progresif motilite için bilgisayar destekli sperm analiz çıktılarını giriniz. Sperm konsantrasyonunu filtrelenmiş sperm numune tüpüne yazın ve tüpü kriyoprezervasyon iş istasyonuna aktarın.
Paylaşılan mercan biyo-bankacılığı otomatik veri sayfasını açın ve Kriyoprezervasyon sekmesini seçin. Serolojik bir pipet kullanarak, sperm örneğinin hacmini çizerek ve aynı tüpe geri atarak ölçün. E sütunundaki değeri girin. Gerekli kriyoprotektan konsantrasyonu için otomatik hesaplanan sütun 1'i ve eklenecek kriyofiltre hacmi için H sütununu kontrol edin.
Bir zamanlayıcı başlatın. Ve bir pipet kullanarak, numuneyi sürekli ve nazik bir şekilde karıştırarak kriyo-seyreltici DMSO'yu damla damla ekleyin. Kriyodilatör baskısının zamanını P sütununa kaydedin. Doldurulacak kriyo şişelerinin sayısını belirlemek için K sütununu okuyun.
Steril barkodlu kriyo şişelerinin kapağını açın ve kapakları steril bir yüzeye yerleştirin. Serolojik bir pipet ve bir alikotasyon pipetleyici kullanarak, bir mililitre numuneyi barkodlu kriyo şişelerine ve recap şişelerine ayırın. Bir termokupl şişesini ve tüm doldurulmuş numune şişelerini oda sıcaklığında boş bir kriyo raf ekine yerleştirin.
Ardından, filtrelenmiş deniz suyuna %10 DMSO içeren kukla kriyo şişelerini kriyo rafındaki boş yuvalara yerleştirin. Çalışma numarasını otomatik veri sayfasının U sütununa girin ve kriyo rafı seri numarasını V sütununa tarayın. İmleci Z sütununun doğru hücresine yerleştirin ve termokupl şişesini, ardından tüm kriyo şişesi tüplerini tarayın. Kriyoprotektan dengesinin geri kalanı için yüklü ve taranmış rafları bir kenara koyun.
Kriyo raf soğutma kabını, dakikada yaklaşık 20 santigrat derecede soğutma için gerekli seviyeye kadar sıvı nitrojen ile doldurun. 10 dakikalık kriyoprotektan dengeleme periyodunun ardından termokupl probunu veri kaydediciye bağlayın ve kayda başlayın. Dolu kriyo rafını yavaşça soğutma kabına yerleştirin ve kapağı uygulayın.
Termokupl şişesi veri kaydedicide 80 santigrat derece veya daha düşük gösterdiğinde, numuneleri söndürmek için kriyo raf ekini bir sıvı nitrojen banyosuna aktarın. Kriyo şişelerini raftan çıkarın ve biyobankaya taşınmak üzere kuru bir nakliyeciye aktarın. Acropora millepora'da, sabit örtü kayma odası slaytları, Makler sayma odasına kıyasla sperm konsantrasyonu sayılarının yarısından daha azını gösterdi.
Makler sayma odasının bilinen bir konsantrasyonda ticari olarak temin edilebilen lateks mikro boncuklarla doğrulanması, beklenen aralıkta düşük değişkenlik ile tutarlı sayımlarla sonuçlandı. Kriyodilasyon olarak %20 veya %30 DMSO kullanılarak dondurularak saklanan örneklerde toplam, hareketli veya aşamalı olarak hareketli spermlerin çözülme sonrası konsantrasyonlarında önemli bir fark gözlenmemiştir.
